[發明專利]抗中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白的單克隆抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201410377739.4
• 申請日: 2014-08-02
• 公開（公告）號: CN104130328A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 程順峰;鄧燈;吳曉春;張敏
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸;孫洪葉

1.一種抗中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白的單克隆抗體，其特征在于所述的單克隆抗體是由名稱為：雜交瘤細胞株ES，保藏號為：CCTCC?NO:?C201414，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，保藏日期為：2014年01月07日的雜交瘤細胞分泌的。

2.根據權利要求1所述的抗中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白的單克隆抗體的制備方法，其特征在于它包括以下步驟：抽取中華絨螯蟹血淋巴，離心得到全血細胞；全血細胞經流式細胞儀分選得到中華絨螯蟹顆粒血細胞；顆粒血細胞經細胞裂解液、超聲波破碎、離心得顆粒血細胞細胞膜蛋白；以中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜蛋白為樣品進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對30.9kDa蛋白條帶進行蛋白提純；以提純的中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白作為抗原，免疫Balb/C小鼠；取免疫小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合；間接酶聯免疫吸附法篩選陽性雜交瘤細胞株；對陽性雜交瘤細胞株進行克隆，最后篩選得到一株能穩定分泌抗中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株ES；其分泌的抗體為抗中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜30.9kDa蛋白的單克隆抗體，經激光共聚焦法、流式免疫熒光法和轉印免疫印跡法驗證其特性。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的流式細胞儀分選血細胞是將中華絨螯蟹全血細胞經流式細胞儀分選，得到的兩團細胞中居散點圖中間的一團即為顆粒血細胞。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的免疫學檢測篩選方法是間接酶聯免疫吸附法，將融合雜交瘤細胞上清液分別與中華絨螯蟹顆粒血細胞細胞膜蛋白反應，而后加入堿性磷酸酶（AP）標記羊抗小鼠IgG抗體，酶標儀OD_492nm條件下記錄、篩選抗顆粒血細胞細胞膜的單克隆抗體，即雜交瘤細胞株ES。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的免疫學鑒定方法是流式免疫熒光法、激光共聚焦法和轉印免疫印跡法。