[發明專利]含糖聚合物修飾納米粒的制備方法

在審

• 申請號: 201410376255.8
• 申請日: 2014-08-03
• 公開（公告）號: CN105311639A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 孫仁
• 申請（專利權）人: 孫仁
• 主分類號: A61K47/34
• 分類號: A61K47/34;A61K47/32;A61K9/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于藥品技術領域，尤其涉及一種含糖聚合物修飾納米粒的制備方法。

背景技術

納米粒是藥物傳輸系統（DrugDeliverySystem,DDS）中的重要載體，但注射入血管后,大部分會被網狀內皮系統吞噬，這成為藥物生物利用度低的主要原因之一。通過對納米球進行修飾，不僅可增強其表面親水性從而減少被RES的攝取，還可使其與特定細胞結合從而提高靶向生物利用度。含糖聚合物通常親水性較好，且可被細胞膜表面大量存在的糖基受體識別而產生特異吸附，是用于修飾納米粒、使其與細胞特異結合的良好生物相容性材料。葡萄糖是最簡單的單糖，可被血液中紅細胞表面大量存在的葡萄糖轉運蛋白(GLUT)特異識別并吸收利用。利用這一特性，合成含有葡萄糖基的聚苯乙烯衍生物——聚，并以PVG修飾聚乳酸(PLA)納米粒，通過紅細胞吸附實驗以及抑制吸附實驗考察PVG與紅細胞膜表面的GLUT發生的特異結合作用，以及PVG修飾的納米粒與紅細胞間的特異吸附作用。

但現有的含糖聚合物修飾納米粒的制備方法還存在缺陷，如成功率低、造成環境的污染，限制了制劑的產業化前景。

發明內容

本發明就是針對上述問題，提供一種成功率高且環境友好的一種含糖聚合物修飾納米粒的制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案。

含糖聚合物修飾納米粒的制備方法，包括下步驟。

（1）主要材料：N’N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙酰丙酮，對氯甲基苯乙烯，異硫氰酸熒光素，細胞松弛素B,聚；DMEM培養基，EDTA胰酶,胎牛血清，其它試劑均為分析純。

（2）主要儀器：動態光散射粒徑儀，倒置位相差顯微鏡，熒光顯微鏡，核磁共振波譜儀，CO2細胞培養箱。

（3）乙酰丙酮（1）溶于DMF，在冰浴中分多次向溶液中加入NaCN。冷卻2h后，撤去冰浴，在50℃油浴條件下，滴加對氯甲基苯乙烯，使1與2通過置換反應脫去HCl生成單體I。將單體I溶于苯，在60°C下反應6h聚合，冷卻后加入甲醇使聚合物完全沉淀后，凍干得到聚合物II。將聚合物II溶解于氘代三氟乙酸與水混合液中，室溫下攪拌40min，置于半透膜中，以去離子水透析3天后，蒸發溶劑，凍干，得到PVG。

（4）采用PVG處理35mm聚苯乙烯培養皿表面，培養后觀察細胞吸附情況。表面處理過程如下：將2mlPVG水溶液加入培養皿中靜置2h，吸出PVG溶液，用1mLPBS洗滌三次。實驗中除了采用PVG處理的培養皿外，采用另一種含糖聚合物PVLA處理的培養皿以及未處理的培養皿作為對比。

作為一種優選方案，取成年人血2mL，用10mL0.04%EDTA溶液稀釋，離心得到紅細胞，PBS洗滌三次后接種至上述培養皿中，置于細胞培養箱培養2h，吸除上層液體，使用等量PBS洗滌，用EDTA胰酶胰解，離心后計算吸附細胞數。計算細胞吸附率：細胞吸附率=細胞吸附數/接種細胞數×100%。

本發明有益效果。

本發明通過對納米球進行修飾，不僅可增強其表面親水性從而減少被RES的攝取，還可使其與特定細胞結合從而提高靶向生物利用度。含糖聚合物通常親水性較好，且可被細胞膜表面大量存在的糖基受體識別而產生特異吸附，是用于修飾納米粒、使其與細胞特異結合的良好生物相容性材料。另外，本發明成功率高且環境友好。

具體實施方式

含糖聚合物修飾納米粒的制備方法，包括下步驟。

（1）主要材料：N’N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙酰丙酮，對氯甲基苯乙烯，異硫氰酸熒光素，細胞松弛素B,聚；DMEM培養基，EDTA胰酶,胎牛血清，其它試劑均為分析純。

（2）主要儀器：動態光散射粒徑儀，倒置位相差顯微鏡，熒光顯微鏡，核磁共振波譜儀，CO2細胞培養箱。

（3）乙酰丙酮（1）溶于DMF，在冰浴中分多次向溶液中加入NaCN。冷卻2h后，撤去冰浴，在50℃油浴條件下，滴加對氯甲基苯乙烯，使1與2通過置換反應脫去HCl生成單體I。將單體I溶于苯，在60°C下反應6h聚合，冷卻后加入甲醇使聚合物完全沉淀后，凍干得到聚合物II。將聚合物II溶解于氘代三氟乙酸與水混合液中，室溫下攪拌40min，置于半透膜中，以去離子水透析3天后，蒸發溶劑，凍干，得到PVG。

（4）采用PVG處理35mm聚苯乙烯培養皿表面，培養后觀察細胞吸附情況。表面處理過程如下：將2mlPVG水溶液加入培養皿中靜置2h，吸出PVG溶液，用1mLPBS洗滌三次。實驗中除了采用PVG處理的培養皿外，采用另一種含糖聚合物PVLA處理的培養皿以及未處理的培養皿作為對比。