[發明專利]一種甘草藥材的檢測方法

在審

• 申請號: 201410373582.8
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104198599A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 宋平順;李登鵬;李波;韓斌;趙建邦;陳杰;何祿仁;楊錫;李士博;趙端瑋
• 申請（專利權）人: 甘肅中天藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

技術領域

本發明屬于中藥材質量檢測領域，具體涉及一種甘草藥材的質量檢測方法。

背景技術

甘草為多年生草本植物甘草(Glycyrrhiza?urlensis?Fisch.)的根及根莖，性味甘平，歸心、肺、脾、胃經，是臨床上常用的藥材之一，具有“十方九草”的美稱。藥理研究表明甘草具有補脾益氣、潤肺止咳、通經脈、利氣血、清熱解毒、止血祛痰潤肺的功效，臨床上被廣泛地用于治療胃潰瘍和十二指腸潰瘍、咽喉腫痛、支氣管炎、咳嗽、關節炎、過敏等疾病及用于保肝、降血脂、抗癌、抗干擾素誘生及增強細胞免疫調節等。甘草含有多種化學成分，主要成分有甘草酸、甘草苷等。現代研究表明甘草含有的成分甘草酸和甘草苷是甘草具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調和諸藥等多種藥理活性。具有廣泛的生理活性作用，因此所含甘草酸、甘草苷含量的多少常作為甘草質量控制的重要指標。

近幾年甘草的市場需求量持續增加，野生資源逐年減少，人工栽培發展緩慢，使得甘草資源蘊藏量和產量都在大幅下降。導致市場上出現了很多偽品，其中不少偽品的農藥殘留量超標爆表，給甘草的質量、用藥的安全性及有效性帶來了很大的沖擊，已成為制約甘草系列藥材開發的瓶頸。

目前，正品甘草的有效檢測方法是傳統的形態特征和理化特性的鑒別方法，具有一定的局限性，不足以從整體上控制甘草的質量，作為一味臨床常用中藥，其真偽優劣受其理化指標、農藥殘留量多等諸多因素的影響，因此有必要建立一種科學的質量檢測方法對甘草的質量進行評價。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于現有技術中甘草檢測方法復雜，質量難以調控的問題，進而提供一種準確度高，簡單、快速的檢測甘草的方法。

為解決上述技術問題，本發明是通過如下技術方案實現的：

本發明提供了一種甘草的檢測方法，該方法包括如下甘草酸、甘草苷的含量測定步驟以及農藥殘留量的測定步驟，其中：

一種甘草的檢測方法，其特征在于，該方法包括如下甘草苷有效成分總量的測定步驟以及農藥殘留量的測定步驟，其中，

A：所述甘草酸、甘草苷總量的測定包括如下步驟：

(1)精密稱取甘草苷對照品、甘草酸銨對照品，加70％乙醇分別制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸銨0.2mg的溶液，即為對照品溶液；

(2)精密稱取待測甘草藥材粉末0.2g，精密加入70％乙醇100ml，稱定重量并超聲處理，放冷再稱定重量，用70％乙醇補足減失的重量，濾過并取續濾液，即得供試品溶液；

(3)按照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.05％的磷酸溶液為流動相B，按照如下程序進行梯度洗脫：從0-8min，流動相A：流動相B的體積比為19％：81％；從8-35min，流動相A：流動相B的體積比由19％：81％→50％：50％；從35-36min，流動相A：流動相B的體積比由50％：50％→100％：0；從36-40min，流動相A：流動相B的體積比由100％：0→19％：81％；檢測波長為237nm；

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；理論板數按甘草苷峰計算應不低于5000；

B：所述農藥殘留量的測定包括如下步驟：

(1)精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作為內標貯備液；

分別精密量取各農藥對照品貯備溶液1ml及所述內標貯備液1ml，加丙酮定容至100ml，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同濃度的溶液，作為混合對照品溶液；

另取核糖酸內酯適量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸內酯的溶液，另取山梨醇適量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內酯、山梨醇溶液各1ml混勻，加乙腈定容至10ml，作為分析保護劑；

(2)精密稱取待測藥材細粉10g，并加入氯化鈉1g混勻，精密加入丙酮100ml，冰浴超聲處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有1g無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30分鐘；隨后精密量取上述溶液60ml減壓濃縮至近干，并加入體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液溶解樣品并定容至10ml，過濾后取濾液經GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干；