[發明專利]一種甘草藥材的檢測方法

在審

• 申請號: 201410373582.8
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104198599A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 宋平順;李登鵬;李波;韓斌;趙建邦;陳杰;何祿仁;楊錫;李士博;趙端瑋
• 申請（專利權）人: 甘肅中天藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

1.一種甘草的檢測方法，其特征在于，該方法包括如下甘草酸、甘草苷有效成分總量的測定步驟以及農藥殘留量的測定步驟，其中，

A：所述甘草酸、甘草苷總量的測定包括如下步驟：

(1)精密稱取甘草苷對照品、甘草酸銨對照品，加70％乙醇分別制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸銨0.2mg的溶液，即為對照品溶液；

(2)精密稱取待測甘草藥材粉末0.2g，精密加入70％乙醇100?ml，稱定重量并超聲處理，放冷再稱定重量，用70％乙醇補足減失的重量，濾過并取續濾液，即得供試品溶液；

(3)按照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.05％的磷酸溶液為流動相B，按照如下程序進行梯度洗脫：從0-8min，流動相A：流動相B的體積比為19％：81％；從8-35min，流動相A：流動相B的體積比由19％：81％→50％：50％；從35-36min，流動相A：流動相B的體積比由50％：50％→100％：0；從36-40min，流動相A：流動相B的體積比由100％：0→19％：81％；檢測波長為237nm；

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；理論板數按甘草苷峰計算應不低于5000；

B：所述農藥殘留量的測定包括如下步驟：

(1)精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作為內標貯備液；

分別精密量取各農藥對照品貯備溶液1ml及所述內標貯備液1ml，加丙酮定容至100ml，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同濃度的溶液，作為混合對照品溶液；

另取核糖酸內酯適量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸內酯的溶液，另取山梨醇適量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內酯、山梨醇溶液各1ml混勻，加乙腈定容至10ml，作為分析保護劑；

(2)精密稱取待測藥材細粉10g，并加入氯化鈉1g混勻，精密加入丙酮100ml，冰浴超聲處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有1g無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30分鐘；隨后精密量取上述溶液60ml減壓濃縮至近干，并加入體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液溶解樣品并定容至10ml，過濾后取濾液經GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1：1的環已烷-乙酸乙酯溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干；

向上述樣品中加入體積比為1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并轉移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以體積比為1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脫，收集洗脫液，氮吹至近干，隨后加入所述內標貯備液5μl，加乙腈定容至1ml，作為供試品溶液；

(3)精密量取上述各濃度混合對照品溶液及供試品溶液各400μL，并分別加入所述分析保護劑100μL混勻，隨后分別精密吸取1μL，進行氣相色譜-質譜聯用儀測定；其中，

所述氣相色譜分析條件為：取規格為30m×0.25mm×0.25um的彈性石英毛細管柱DB17ms，以高純氦氣為載氣，柱流速1.3ml/分鐘，進樣量1μl，采用高壓不分流進樣，設置進樣口溫度為230℃，升溫程序具體為：初始溫度60℃，以30℃/分鐘升至120℃、以10℃/分鐘升至200℃、以2℃/分鐘升至230℃、以30℃/分鐘升至300℃，并保持7分鐘；

所述EI源質譜測定的條件為：設置電子能量70eV，離子源溫度230℃，接口溫度250℃。

2.根據權利要求1所述的甘草的檢測方法，其特征在于，所述農藥殘留量的測定中，所述GPC凝膠滲透色譜凈化步驟的條件具體為：填料為Bio-Beads?S-X3200-400目，凈化柱為2.5mm×40cm，具體洗脫參數為凈化去雜900s，目標物收集1200s，柱子清洗300s。