[發(fā)明專利]一種具有抗腫瘤活性的核桃多肽?鋅螯合物的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410370731.5 | 申請日： | 2014-07-30 |
| 公開（公告）號： | CN104152520B | 公開（公告）日： | 2017-01-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 任嬌艷;張榕;賴婷;廖文鎮(zhèn);林澤華 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南理工大學(xué) |
| 主分類號： | C12P21/06 | 分類號： | C12P21/06;C07K1/34 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 511400 廣東省廣州市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 具有 腫瘤 活性 核桃 多肽 鋅螯合物 制備 方法 | ||
1.一種具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：?
（1）限制性酶解：將核桃粕，與水混合，加入占核桃粕蛋白質(zhì)量?0.5~1.5?%的蛋白酶，在55~60℃酶解；沸水中10~30?min滅酶，離心，取上清液，抽濾，得到核桃粕蛋白多肽；
（2）超濾膜分離：利用超濾膜對核桃粕蛋白多肽進(jìn)行分離純化；
（3）濃縮、噴霧干燥：收集超濾后的酶解液于?55~65℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得產(chǎn)物經(jīng)噴霧干燥制得核桃多肽；
（4）在鋅溶液中加入核桃多肽進(jìn)行螯合反應(yīng)：將ZnCl2溶于蒸餾水配成ZnCl2溶液，加入多肽溶液后置于漩渦儀混勻，在?50~55℃下震蕩反應(yīng)?20~24?h；
（5）將螯合液進(jìn)行透析：螯合反應(yīng)結(jié)束后，用透析袋于?4~10?℃對溶液進(jìn)行透析；
（6）冷凍干燥，得核桃多肽-鋅螯合物：對透析后的螯合液冷凍干燥，得到核桃多肽-鋅螯合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述核桃粕的蛋白質(zhì)含量為?40~45?w/w?%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述核桃粕與水的質(zhì)量比為?1:7~1:9；所述蛋白酶為木瓜蛋白酶；所述酶解的時間為12~16?h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（2）所述超濾膜截留分子量范圍為?3?kDa；超濾后收集分子量?<?3kDa?的濾過組分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（3）所述核桃粕蛋白酶解液濃縮至固形物?20~?25?Brix?后噴霧干燥，所得粉末顆粒細(xì)度均一。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（4）所述ZnCl2溶液的濃度為?6.0?-?8.0?mg/ml；加入核桃多肽后使其在ZnCl2溶液中的濃度達(dá)到?5.0?-?7.0?mg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（5）所述透析袋的截留分子量為?500?~1000?Da、透析時間為?20-?24?h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，其特征在于，步驟（6）所述冷凍干燥的時間為36~40?h。
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