[發明專利]一種具有抗腫瘤活性的核桃多肽?鋅螯合物的制備方法

有效

• 申請號: 201410370731.5
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104152520B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 任嬌艷;張榕;賴婷;廖文鎮;林澤華
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明涉及一種化合物的制備方法，具體涉及一種具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法。

背景技術

鋅是人體必需的14種微量元素之一，它不但具有重要的生物功能，而且參與多種酶的合成與組成，與肌體的代謝及某些疾病的發生有極為密切的關系。機體缺鋅會導致基礎代謝下降、蛋白質利用率降低、食欲與消化功能低下、影響生長發育等多方面的負面影響。

第一代補鋅劑即無機鋅鹽，如硫酸鋅。無機鋅鹽易吸潮性、生物利用率低、口感不適，服用后副作用較多，已被人類淘汰。第二代鋅鹽是以有機弱酸作配體合成的補鋅劑，如乳酸鋅、葡萄糖酸鋅。但其合成復雜，產率低，而且含鋅量較低，且不適于糖尿病人的補鋅。第三代鋅補劑即氨基酸螯合鋅，它化學穩定性好，安全、無毒，且生物利用率高。第四代則是多肽-Zn²⁺配合物。多肽的轉運系統和游離氨基酸相比，具有耗能低、轉運速度快和不易被飽和的特點，此外多肽還具有很好的營養作用：提高氨基酸的利用率，促進蛋白質的合成和礦質元素的吸收等。

核桃粕是核桃榨油后的副產物，含有40%以上的蛋白質。核桃蛋白是一種優質的植物蛋白，含有18種氨基酸，且人體所需的8種必需氨基酸含量合理。但目前大部分優質核桃粕直接當作飼料和肥料處理掉，浪費了許多優質蛋白質資源。

為了解決核桃粕資源的浪費及提供一種高效的補鋅劑等問題，我們采用限制性酶法改性技術對核桃粕進行深加工并且和無機鋅源螯合。核桃多肽-鋅螯合物不僅是一種高效的補鋅劑，其還具有很高的抗腫瘤活性，在用于補鋅劑保健品及藥品的制備的同時，有望成為治療癌癥的高效低毒藥劑。

有關活性多肽-鋅螯合物的研究目前甚少，且都只是涉及多肽-鋅螯合的制備工藝，并沒有研究螯合物的抗腫瘤活性。例如：（1）中國專利申請公布號CN?103626867?A中公開了“一種魚皮膠原蛋白多肽螯合鋅的制備工藝”，該專利中涉及的是對多肽螯合鋅工藝條件的優化。（2）中國專利申請公布號CN?101225102?A中公開了“羅非魚魚皮多肽螯合鋅鹽的制備方法”，該專利只是提供了一種魚皮多肽螯合鋅鹽的制備方法。（3）中國專利申請公布號CN?103494214?A中公開了“酪蛋白磷酸肽鋅螯合物”，該專利涉及的是酪蛋白磷酸肽與鋅螯合制備的工藝技術。

綜上所述，目前關于核桃多肽-鋅螯合物的抗腫瘤活性的報道尚無。本發明人以核桃粕為原料，限制性酶解法制備核桃蛋白活性多肽，并與無機鋅源進行螯合，經透析，制備具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物。該法制得的產品安全性高，方法簡便可大量生產，具有極高的抗腫瘤活性，可發展成為治療癌癥尤其是肝癌的高效低毒藥劑。

發明內容

本發明的目的在于通過核桃多肽與無機鋅鹽制備出具有抗腫瘤活性的螯合物，為相關抗癌藥物的開發提供一種基料。

一種具有抗腫瘤活性的核桃多肽-鋅螯合物的制備方法，包括如下步驟：?

（1）限制性酶解：將核桃粕，與水混合，加入占核桃粕蛋白質量?0.5~1.5?%的蛋白酶，在55~60℃酶解；沸水中10~30?min滅酶，離心，取上清液，抽濾，得到核桃粕蛋白多肽；

（2）超濾膜分離：利用超濾膜對核桃粕蛋白多肽進行分離純化；

（3）濃縮、噴霧干燥：收集超濾后的酶解液于?55~65℃真空旋轉蒸發濃縮，所得產物經噴霧干燥制得核桃多肽；

（4）在鋅溶液中加入核桃多肽進行螯合反應：將ZnCl₂溶于蒸餾水配成ZnCl₂溶液，加入多肽溶液后置于漩渦儀混勻，在?50~55℃下震蕩反應?20~24?h；

（5）將螯合液進行透析：螯合反應結束后，用透析袋于?4~10?℃對溶液進行透析；

（6）冷凍干燥，得核桃多肽-鋅螯合物：對透析后的螯合液冷凍干燥，得到核桃多肽-鋅螯合物。

???上述方法中，步驟（1）所述核桃粕的蛋白質含量為?40~45?w/w?%。?

上述方法中，步驟（1）所述核桃粕與水的質量比為?1:7~1:9；所述蛋白酶為木瓜蛋白酶；所述酶解的時間為12~16?h。

上述方法中，步驟（2）所述超濾膜截留分子量范圍為?3?kDa；超濾后收集分子量?<?3kDa?的濾過組分。

上述方法中，步驟（3）所述核桃粕蛋白酶解液濃縮至固形物?20~?25?Brix?后噴霧干燥，所得粉末顆粒細度均一。