[發明專利]一種魚類組織中三種脫碘酶活性的測定方法

在審

• 申請號: 201410369496.X
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104165988A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 李大鵬;劉子棟
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N23/00
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種魚類組織中三種脫碘酶活性的測定方法，其步驟包括：(1)稱取動物組織后用緩沖液將動物組織配制成質量濃度為1-5％的勻漿，并離心取上清夜；(2)測定所述上清液中蛋白質含量；(3)將所述上清液按照體積比1：1加入孵育液在37℃下孵育120min；將緩沖液按照同樣方法加入孵育液后在37℃下孵育120min作為對照組；測定Ⅰ型脫碘酶活性的孵育液為50000cpm¹²⁵I-rT₃，0.1μM?rT₃，15mM?DTT混合物；測定Ⅱ型脫碘酶的孵育液為50000cpm¹²⁵I-T₄，1nM?T₄，30mMDTT混合物；測定Ⅲ型脫碘酶的孵育液為150000cpm¹²⁵I-T₃，1nM?T₃，30mM?DTT混合物；(4)加入BSA溶液終止反應后沉淀離心，取上清液用放射免疫計數儀分別測定總放射性及上清液的放射性cpm值，依據下述經驗公式分別計算動物組織中三種脫碘酶活性：

其中：其中SCc＝SC－BC；

BC：對照管的放射性計數；

SC：樣品管的放射性計數；

SA：孵育液中反應底物的含量/TC；

TC：總放射性計數。

2.根據權利要求1所述魚類組織中三種脫碘酶活性的測定方法，其特征在于：所述緩沖液為0.1M的pH＝7.0的PBS緩沖液，其中含有2mM?EDTA，1Mm?DTT。

3.根據權利要求1所述魚類組織中三種脫碘酶活性的測定方法，其特征在于：所述步驟(4)中BSA溶液4℃的質量體積濃度為5％的BSA溶液，BSA溶液的加入量與上清液的體積比為1：1。

4.根據權利要求1所述魚類組織中三種脫碘酶活性的測定方法，其特征在于：所述步驟(4)中加入BSA溶液后沉淀是加入了質量體積濃度為10％的TCA溶液，并在3500r/min下離心30min，TCA溶液的加入量與上清液的體積比為2：1。