[發明專利]克倫巴胺適配體與檢測克倫巴胺的適配體電化學生物傳感器

有效

• 申請號: 201410369428.3
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104152455A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 劉大嶺;陳丹;姚冬生;謝春芳
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N27/327;G01N27/26
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，涉及一種克倫巴胺適配體以及檢測克倫巴胺的適配體電化學生物傳感器，以及該傳感器的制備方法與檢測方法。?

背景技術

克倫巴胺(Phenylethanolamine，PHL)，化學命名為2-[4-(4-硝基苯基)丁基-2-氨基]-1-(4-甲氧基苯基)乙醇，又名苯乙醇胺A，分子量為344.17，分子式C₁₉H₂₄N₂O₄，是一種人工合成的化學物質，化學結構式如下：?

克倫巴胺是福莫特羅的同分異構體，具有同瘦肉精和萊克多巴胺相同的作用和效果，屬于β-激動劑的一種，具有營養再分配作用。2010年12月，我國農業部將克倫巴胺列入禁止在飼料和動物飲用水中使用的物質名單，因此，建立飼料中克倫巴胺的快速檢測技術十分重要。由于克倫巴胺是在我國首先發現的一種新“瘦肉精”，目前國外尚無關于克倫巴胺檢測方法的報道。國內也只有少數研究報道了應用液相色譜-串聯質譜法檢測飼料和豬肉中克倫巴胺，超高效液相色譜法測定飼料中克倫巴胺，我國2010年底頒布的檢測標準《飼料中苯乙醇胺A的測定》(農業部1486號公告-1-2010)也采用了高效液相色譜-串聯質譜法β-激動劑類殘留檢測方法的研究。由于液相色譜-串聯質譜儀價格昂貴，在一般的檢測機構普及率不高。因此，建立一種快速、靈敏、低成本的克倫巴胺檢測技術具有重要意義。?

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種可用于克倫巴胺含量快速檢測的生物傳感器及其組裝方法。該生物傳感器靈敏度更高，響應時間更快，并且可快速用于克倫巴胺檢測。?

本發明的第一個目的是提供一種克倫巴胺適配體。?

本發明所述的克倫巴胺適配體為含有GCGTAGCTACTCATAT序列、長度為20-25個堿基的單鏈DNA探針，且3’端修飾了3’-NH₂-(CH₂)₇-。?

本發明的第二個目的是提供一種檢測克倫巴胺的適配體電化學生物傳感器。?

本發明所述的檢測克倫巴胺的適配體電化學生物傳感器，含有本發明所述的克倫巴胺適配體。?

本發明的第三個目的是提供一種適配體電化學生物傳感器的制備方法。?

本發明所述的適配體電化學生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：?

(1)裸金電極表面的拋光及活化處理：將裸金電極用氧化鋁粉末打磨，用超純水超聲清洗去除氧化鋁粉末，將清洗好的裸金電極浸入新鮮配制的熱的Piranha溶液于20-25℃下活化10分鐘，得到活化的裸金電極；?

(2)活化電極的適配體修飾：合成如本發明所述的適配體，配制100μmol/L的適配體溶液，加入到NaCl溶液中配制成2μmol/L適配體組裝液；將步驟(1)所得的活化的裸金電極浸入適配體組裝液中，4℃下組裝24小時，得到所述的適配體電化學生物傳感器。?

本發明的第四個目的是提供一種本發明所述的適配體電化學生物傳感器的用途，即將本發明所述的適配體電化學生物傳感器用于克倫巴胺的檢測。?

本發明的第五個目的是提供一種檢測克倫巴胺的方法，該方法是基于本發明所述的適配體電化學生物傳感器的檢測方法。?

本發明所述的適配體電化學生物傳感器的檢測克倫巴胺的方法，包括以下步驟：?

(1)對克倫巴胺標準溶液進行檢測，建立標準曲線：?

將所述的適配體電化學生物傳感器作為工作電極，Ag/AgCl(飽和KCl)電極作為參比電極，鉑絲電極作為對電極；?

將所述的適配體電化學生物傳感器用超純水沖洗，去除未結合的適配體，然?后置于濃度為5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]為1：1的含0.1mol/L?KCl的電解液中，進行交流阻抗分析，初始電位為0.22V，頻率為0.1-1.0×10⁵Hz，得到適配體電化學生物傳感器的交流阻抗圖譜及其阻抗值Ret0；?