[發明專利]單唾液酸四已糖神經節苷脂GM1原料的制備方法

有效

• 申請號: 201410368540.5
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104151372B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 釧助勝;彭亞琦
• 申請（專利權）人: 湖南利諾生物藥業有限公司
• 主分類號: C07H15/10
• 分類號: C07H15/10;C07H1/00
• 代理公司: 郴州大天知識產權事務所(普通合伙)43212
• 代理人: 徐起堂

1.一種單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

a.取凍存新鮮豬腦，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入豬腦重2-5倍重量的純化水用膠體磨勻漿10min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至80-85℃后保溫10-20min，再按豬腦重每1kg加入2-5 ml的比例加入濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至20-50℃，再以3500-4000r/min的速度離心分離5min，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得純化腦蛋白；

b. 將經上述步驟得到的純化腦蛋白加入甲醇進行勻漿，再用氫氧化鈉調pH值為7-9，然后攪拌，離心過濾，收集上清液，即得醇提液；

c. 將經上述步驟得到的醇提液濃縮，得醇提濃縮液；

d. 將經上述步驟得到的醇提濃縮液，調pH值為2-5，水解，然后離心分離，收集上清液，即得水解液；

e. 將經上述步驟所得水解液連續多次循環超濾，截留分子量為1600道爾頓以上的物質，得GM1的初純品，再將GM1的初純品超濾，去除分子量為1500道爾頓以下的物質，即得GM1溶液純品；

f. 將經上述步驟所得GM1溶液純品干燥，即得單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料。

2.根據權利要求1所述單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于：所述b步驟，將經a步驟所得純化腦蛋白按豬腦重量3-6倍的比例加入濃度為75-95%的甲醇，膠體磨勻漿1次，倒入提取罐中，用6mol/L氫氧化鈉調pH值為7-9，加熱保溫至40-60℃攪拌3-8h，再以3500-4000r/min的速度離心分離5min，棄沉淀，收集上清液，即得醇提液。

3.根據權利要求1所述單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于：所述c步驟，將經b步驟所得醇提液，60-80℃條件下真空減壓濃縮至豬腦重量的1/3-1/5，即得醇提濃縮液。

4.根據權利要求1所述單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于：所述d步驟，將經c步驟所得醇提濃縮液，用6mol/L鹽酸溶液調pH值為2-5，60-80℃條件下水解3-5h，然后冷卻至20-50℃，以3500-4000r/min的速度離心分離5min，棄沉淀，收集上清液，再用6mol/L氫氧化鈉溶液調pH值為7-8，即得水解液。

5.根據權利要求1所述單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于：所述e步驟，將d步驟所得水解液置于能截留分子量為1600道爾頓的中空纖維超濾膜內進行連續多次循環超濾，截留分子量為1600道爾頓以上的物質，得GM1的初純品，再將GM1的初純品置于能夠截留分子量為1500道爾頓的中空纖維超濾膜中超濾，去除分子量為1500道爾頓以下的物質，得GM1溶液純品。

6.根據權利要求1所述單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料的制備方法，其特征在于：所述f步驟，將e步驟所得GM1溶液純品以﹣60℃冷凍干燥或噴霧干燥，即得單唾液酸四己糖神經節苷脂GM1原料。