[發(fā)明專利]一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒及其制備方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410368022.3
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104181310A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設計）人: 趙金博;張展英;周蓓昕
• 申請（專利權）人: 美艾利爾（上海）診斷產(chǎn)品有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/531
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

技術領域

本發(fā)明涉及體外免疫診斷試劑領域，尤其涉及一種檢測尿液中β-hCG的時間分辨免疫熒光試劑盒及其制備方法和應用，實現(xiàn)對尿液中β-hCG含量的定量檢測。

背景技術

人絨毛膜促性腺激素(hCG)，是由胎盤絨毛膜的合體滋養(yǎng)層產(chǎn)生的一種糖蛋白，β亞單位是特異性抗原，其結構與其它垂體前葉激素不同。

質量是一家生產(chǎn)型企業(yè)的立足之本。許多做hCG測試筆的體外診斷公司，需要利用含一定濃度β-hCG標準品進行測試筆功能性檢測，從而確認此批測試筆是否達到標準，能否出售，這是一個關鍵質量控制點。標準品若不合格，有可能對測試筆的性能進行誤判，對企業(yè)產(chǎn)生不利的影響。因此有必要發(fā)展一種靈敏度高、檢測范圍廣、穩(wěn)定性好的定量檢測試劑盒，用于監(jiān)測含一定濃度的β-hCG標準品的性能。

目前市售的試劑盒大多以酶聯(lián)免疫為主，以血清為標本進行定量檢測β-hCG含量，靈敏度一般，檢測范圍偏窄，取樣操作復雜、不方便。尿液中β-hCG含量的測定已經(jīng)是體外快速檢測產(chǎn)品的一項重要指標，通過尿液中β-hCG含量的多少，可直接判斷出是否懷孕以及懷孕的周數(shù)，取樣簡單、便捷。作為早早孕體外快速檢測產(chǎn)品的質控標準品，也是用尿液來配制或者標定的；容易引起疏忽的是：不管是正常男性或婦女的尿液中，本身就存在一定含量(極低水平)的β-hCG抗原。因此定量測定尿液中β-hCG的含量，可為標準品的準確性提供一種定量的保證，也可輔助早期判斷妊娠、流產(chǎn)、宮外孕等。

時間分辨免疫熒光分析法(Time-resolved?fluoroimmunoassay,TRFIA)，是利用具有獨特熒光特性的鑭系元素作為標記示蹤物，代替酶、同位素等，成為發(fā)光免疫分析中的一種重要方法，具有靈敏度高、示蹤物穩(wěn)定、不受樣品自然熒光干擾、無放射性污染等許多優(yōu)點。

目前，對于采用時間分辨免疫熒光分析法檢測尿液中β-hCG含量尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題之一是提供一種檢測尿液中β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其靈敏度高、檢測范圍廣、穩(wěn)定性好，取樣方便，快速。

本發(fā)明要解決的技術問題之二是提供該試劑盒的制備方法。

本發(fā)明要解決的技術問題之三是提供該試劑盒在檢測β-hCG含量中的應用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案：

在本發(fā)明的一方面，提供一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，包括盒體和盒體上方的盒蓋，所述盒體內(nèi)設有放置包被抗β-hCG單克隆抗體的酶標板的隔層；所述盒體內(nèi)設有放置試劑瓶的容器孔，所述容器孔內(nèi)放置有：

裝有分析液的試劑瓶；

裝有清洗液的試劑瓶；

裝有增強液的試劑瓶；

裝有β-hCG校準品的試劑瓶；其中，β-hCG校準品的濃度已知，用于建立標準曲線；

裝有標記的抗α-TSH單克隆抗體的試劑瓶。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述容器孔內(nèi)還放置有：裝有包被液的試劑瓶、裝有封閉保護液的試劑瓶、以及裝有洗脫液的試劑瓶。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述酶標板為帶保護膜的96孔酶標板。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述抗β-hCG單克隆抗體的濃度為1-10μg/ml。

所述標記的抗α-TSH單克隆抗體的標記物可以采用本領域常用的標記物，例如鑭系元素。作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述標記的抗α-TSH單克隆抗體的標記物優(yōu)選是三價銪離子。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述標記的抗α-TSH單克隆抗體中抗體與標記物的標記重量比例是(6-10):1。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，所述β-hCG校準品為尿液配制的β-hCG標準品。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(1)抗β-hCG單克隆抗體包被酶標板的制備：

將抗β-hCG單克隆抗體在包被液中透析，再加入到酶標板上,于2-8℃包被48小時以上；用清洗液清洗酶標板后，加入封閉保護液，室溫封閉20小時以上；甩干封閉保護液干燥密封，置于2-8℃冰箱備用；

(2)三價銪標記的抗α-TSH單克隆抗體的制備：

將抗α-TSH單克隆抗體，用標記液進行透析，取透析好的抗α-TSH單克隆抗體，用標記液稀釋；將抗體加入到凍干的銪標記液中緩慢搖勻后置于2-8℃冰箱中過夜；用純化柱純化2-8℃過夜的標記液，收集標記物，加入0.1％BSA置于-80±10℃冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)β-hCG校準品的制備：