[發明專利]一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201410368022.3
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104181310A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 趙金博;張展英;周蓓昕
• 申請（專利權）人: 美艾利爾（上海）診斷產品有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/531
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

1.一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，包括盒體和盒體上方的盒蓋，其特征在于，所述盒體內設有放置包被抗β-hCG單克隆抗體的酶標板的隔層；所述盒體內設有放置試劑瓶的容器孔，所述容器孔內放置有：

裝有分析液的試劑瓶；

裝有清洗液的試劑瓶；

裝有增強液的試劑瓶；

裝有β-hCG校準品的試劑瓶；

裝有標記的抗α-TSH單克隆抗體的試劑瓶。

2.如權利要求1所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述容器孔內還放置有：裝有包被液的試劑瓶、裝有封閉保護液的試劑瓶、以及裝有洗脫液的試劑瓶。

3.如權利要求1所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述酶標板為帶保護膜的96孔酶標板。

4.根據權利要求1所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述抗β-hCG單克隆抗體的濃度為1-10μg/ml。

5.根據權利要求1所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述標記的抗α-TSH單克隆抗體的標記物是三價銪離子。

6.根據權利要求1或5所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述標記的抗α-TSH單克隆抗體中抗體與標記物的標記重量比例是(6-10):1。

7.根據權利要求1所述的一種檢測β-hCG含量的時間分辨免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述β-hCG校準品為尿液配制的β-hCG標準品。

8.一種根據權利要求5所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)抗β-hCG單克隆抗體包被酶標板的制備：

將抗β-hCG單克隆抗體在包被液中透析，再加入到酶標板上,于2-8℃包被48小時以上；用清洗液清洗酶標板后，加入封閉保護液，室溫封閉20小時以上；甩干封閉保護液干燥密封，置于2-8℃冰箱備用；

(2)三價銪標記的抗α-TSH單克隆抗體的制備：

將抗α-TSH單克隆抗體，用標記液進行透析，取透析好的抗α-TSH單克隆抗體，用標記液稀釋；將抗體加入到凍干的銪標記液中緩慢搖勻后置于2-8℃冰箱中過夜；用純化柱純化2-8℃過夜的標記液，收集標記物，加入0.1％BSA置于-80±10℃冷凍保存備用；

(3)β-hCG校準品的制備：

用β-hCG干粉和陰性尿液配制濃度為0、15、25、37.5、50、75和100mIU/ml的β-hCG校準尿液，置于-80±10℃冷凍保存備用；

所述清洗液、分析液和增強液為市售商品。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述將抗體加入到凍干的銪標記液中，其中抗體與銪標記液的重量比例為(6-10)：1。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述用純化柱純化2-8℃過夜的標記液，收集標記物具體為：取純化柱，用洗脫液洗脫平衡至少2小時，將2-8℃過夜的標記液全部轉入柱子的頂端，重力自然洗脫，以0.25ml/管為單位進行收集。

11.一種根據權利要求1所述的試劑盒在檢測β-hCG含量中的應用，其特征在于，該檢測方法包括如下步驟：

(1)將β-hCG校準品和待檢樣品依次加入到抗β-hCG單克隆抗體包被的酶標板上，再加入分析液，震蕩孵育；

(2)將清洗液用去離子水進行稀釋，然后用已稀釋的清洗液清洗酶標板并甩干；

(3)將純化好的三價銪標記的抗α-TSH單克隆抗體，用分析液稀釋，加入酶標板中，震蕩孵育；

(4)用清洗液清洗酶標板并甩干；

(5)加入增強液，使用全自動時間分辨熒光免疫分析儀檢測熒光信號；

(6)根據熒光數值建立標準曲線，將待檢樣品的熒光信號代入到標準曲線中，求得待檢樣品的濃度。