[發明專利]一種小牛血去蛋白提取物組合物及其注射劑和制法

在審

• 申請號: 201410367957.X
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104147047A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 姬彥峰
• 申請（專利權）人: 哈爾濱圣泰生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K35/14
• 分類號: A61K35/14;A61K47/10;A61K47/36;A61K47/34;A61K9/19;A61K9/08;A61P9/10;A61P25/28
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松

技術領域

本發明屬于醫藥領域，特別涉及一種小牛血去蛋白提取物及其注射劑和制法。

技術背景

小牛血去蛋白提取物水針劑，曾用名：血活素注射液，系由新鮮小牛血或血清經去蛋白、濃縮、超濾或透析等工藝制得的含有無機物及小分子有機物的滅菌水溶液。可增強組織細胞對氧及葡萄糖攝取與利用，改善細胞乏氧狀態和機體內環境，增加心、腦、肝等臟器的血流量，改善微循環。用于腦缺血、腦癡呆、腦外傷及大腦功能不全等腦細胞代謝障礙性疾病的治療。目前，已公開了一些有關小牛血去蛋白提取物的制備工藝，多數工藝采用乙醇沉淀、酶解、高溫、酸堿等方法去除雜蛋白，也有用柱層析除雜的方法。這些方法都存在去除蛋白不完全的問題，臨床使用時會由于雜蛋白未有效去除而發生不良反應，其中的有機物類物質如氨基酸、小肽、核苷酸、嘌呤等發生聚合為大分子物質而易引起過敏反應；而且酶解、高溫、酸堿等方法去除雜蛋白時，還存在破壞其中原有的生物活性、降低其藥用價值的缺點；另外，酸堿法去除雜蛋白還會引入外源離子，這都會降低其藥用價值；另外，由于工藝重現性不好，而難以大規模生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種既不破壞生物活性、又不引入外源離子、能有效去除其中雜蛋白的的小牛血去蛋白提取物的制法，及由該小牛血去蛋白提取物制得的注射劑及制法。

本發明的小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括如下步驟：

a)將小牛血在30-40℃緩化20min，得緩化后的小牛血；

b)向步驟a)得到的緩化后的小牛血中加入鹽酸溶液進行酸沉，調整pH至3.5～4.0，得酸化后的小牛血；所述鹽酸溶液是純化水與質量分數為36％～38％的鹽酸按照1∶1的體積比配制的；

c)將步驟b)得到的酸化后的小牛血在-25℃下低溫冷凍24h，然后再以1℃/min的升溫速度升溫至60℃，并60℃恒溫1h，待冷凍后的小牛血融化后，在離心機轉速為15000轉/分鐘的情況下進行離心分離12min，收集上清液，備用；

d)向步驟c)得到的上清液中加入質量分數為20％的NaOH溶液，調節pH值至8.0～8.5，得堿化后的上清液；

e)將步驟d)得到的堿化后的上清液在-20℃下低溫冷凍24h，然后再以1℃/min的升溫速度升溫至40℃，并40℃恒溫1h，待冷凍后的小牛血融化后，在離心機轉速為13000轉/分鐘的情況下進行離心分離，收集上清液，備用；

f)將步驟e)得到的上清液置于配液罐內，在70r/min的攪拌速度下，按照上清液與乙醇溶液的體積比為1∶2的比例，緩慢加入質量分數為80％的乙醇溶液，在離心機轉速為13000轉/分鐘的情況下進行離心分離，收集上清液，備用；

g)將步驟f)得到的上清液用截流分子量為5000道爾頓的超濾柱進行超濾，所得超濾液在真空度為-0.1MPa、60℃恒溫下進行真空濃縮，濃縮至體積為原超濾液體積的1/15，得濃縮超濾液；

h)將步驟g)得到的濃縮超濾液用截流分子量為5000道爾頓的超濾柱進行超濾，收集超濾后的液體，然后置于配液罐中在70r/min的攪拌速度下混合30min，即得小牛血去蛋白提取物。

步驟c)、e)對小牛血進行冷凍、融化的循壞，可以促使細胞內外的有效物質充分釋放，不破壞有效成分的生物活性、保證有效成分的充分提取；步驟c)以1℃/min的升溫速度升溫至60℃，并60℃恒溫1h，對冷凍的小牛血進行融化，不僅可以有效地、完全地去除其中的雜蛋白，而且不會破壞有效成分的生物活性，同時具有殺菌作用，能對牛源性病毒充分滅活，保證了小牛血去蛋白提取物的安全性；步驟e)以1℃/min的升溫速度升溫至40℃，并40℃恒溫1h，可以進一步去除雜蛋白，滅活牛源性病毒；步驟f)中進一步用乙醇以一定的比例對步驟b)得到的上清液進行混合，進一步去除雜蛋白，充分保證了雜蛋白去除的完全性；超濾柱的使用，進一步保證了雜蛋白去除的完全性。

本發明的小牛血去蛋白提取物的制備方法，不僅能有效地、完全地去除其中的雜蛋白，而且不會破壞有效成分的生物活性，同時具有殺菌作用，能對牛源性病毒充分滅活，保證了小牛血去蛋白提取物的安全性；另外工藝重現性好，利于大規模生產。

由本發明的的制備方法制得的小牛血去蛋白提取物制得的注射劑，包括粉針劑和水針劑。

為了方便存放和運輸，將由本發明的的制備方法制得的小牛血去蛋白提取物制成粉針劑和水針劑，存放和攜帶方便，便于運輸。

本發明的注射劑為粉針劑，粉針劑包括下列重量份的原料：

小牛血去蛋白提取物??4000