[發明專利]檢測CX3CR1基因V249I突變位點的方法和引物

無效

• 申請號: 201410366629.8
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN104195234A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 王淑一;陳奕磊;林筱劍
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測CX3CR1基因V249I突變位點的方法和引物。

背景技術

近年來，隨著生活方式的逐漸改變，糖尿病發病率正在逐年增高，成為腦血管病的常見危險因素之一。臨床資料研究表明，與非糖尿病患者相比，糖尿病性腦梗死患者的病殘率、復發率、死亡率較高，并且病情恢復較慢。糖耐量減低(impaired?glucose?tolerance,IGT)和空腹血糖調節減低(impaired?fasting?plasma?glucose,IFG)，兩者是正常葡萄糖穩態和糖尿病高血糖之間的中間代謝狀態，且均為2型糖尿病高風險的預示因素。有研究顯示IGT患者中已有腦血管意外的風險，在IGT階段各種復雜的關系已經充分暴露，糖代謝發生異常，胰島素抵抗，高胰島素血癥，內皮細胞功能紊亂，氧化應激，血脂異常，血壓升高等交織在一起，從而出現靶器官的損害。因此腦梗死患者的糖代謝異常是預測其預后的重要因素。

Fractalkine(FKN)是炎癥內皮細胞釋放的一種趨化因子，與受體CX3CR1結合以后可以增強自然殺傷細胞(NK細胞)的殺傷力，從而損傷血管內皮細胞，促進動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的形成。因此，觀察高血糖尤其是糖調節異常階段與急性腦梗死患者FKN表達相關性的研究，對急性腦梗死合并糖耐量異常患者的防治工作將會有重要的臨床意義。國外已有文獻報道空腹血糖(FPG)和糖負荷后2h血糖(2hPG)是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的獨立危險因素。另外有研究表明，頸動脈粥樣硬化是導致腦梗死的重要原因之一。隨著對動脈粥樣硬化性疾病其相關發病機制的不斷深入研究，近年來發現一種由炎癥內皮細胞釋放的新趨化因子Fractalkine(FKN)，與表達在淋巴細胞、單核細胞、自然殺傷細胞(NK細胞)上的CX3CR1受體結合以后，可以增強NK細胞的殺傷力，損傷血管內皮細胞，從而促進動脈粥樣硬化性疾病的形成和發展。趨化因子家族是一系列分子量約為8-12KD，結構相似并具有趨化功能，能夠控制細胞定向遷移的細胞因子。趨化因子肽鏈N端的半胱氨酸殘基是高度保守的，根據其相對位置和數量的差異，可以將趨化因子分為四個亞族。Fractalkine(FKN)是目前發現的唯一的CX3C類趨化因子。FKN基因定位于人類第16號染色體中的q13片段。不同于與其他趨化因子的是，FKN有兩種存在形式，即膜結合型FKN和可溶型FKN，其中膜結合型FKN是黏附分子，可溶型FKN是化學誘導物。成熟的膜結合型可分為三段：胞外段，其CX3C趨化因子結構域位于頭部氨基端，含有氨基酸殘基76個，下面連接一段粘蛋白樣的莖狀結構，共有氨基酸殘基241個，其中含有豐富的蘇氨酸(Thr)、脯氨酸(Pro)、絲氨酸(Ser)及谷氨酸(Gly)；跨膜段，共含有疏氨基酸殘基18個；胞內段，有氨基酸殘基37個。膜結合型FKN位于其近膜側的第314-317位氨基酸殘基，即Thr-Arg-Arg-Gln，是一雙堿基的水解位點，可以由蛋白酶水解，則膜結合型FKN轉變成可溶型FKN。可溶型和膜結合型FKN之間的平衡是金屬蛋白酶依賴性蛋白酶通過調節實現的。FKN在人體內分布廣泛。研究表明，在非造血組織、神經細胞及血管內皮細胞表面，均發現有FKN表達。另外，Foussat等也發現在上皮細胞FKN表達較高。大多數FKN在活化的內皮細胞表面表達，既具有黏附功能又具有趨化作用，并且參與了白細胞向炎癥組織游走的過程。FKN通過其黏蛋白樣莖狀結構，可以迅速結合位于細胞表面的高親和受體CX3CR1，從而發揮生物學作用，并且不需要黏附分子參與該過程。另外有實驗發現，FKN還可以增加炎性因子滲出，從而促進炎癥級聯反應的發生。