[發明專利]檢測CX3CR1基因V249I突變位點的方法和引物

無效

• 申請號: 201410366629.8
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN104195234A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 王淑一;陳奕磊;林筱劍
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽

1.檢測CX3CR1基因V249I突變位點的引物，其特征在于，包括：擴增CX3CR1基因V249I突變位點的正、反向引物；其堿基序列為：

V249I-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA

V249I-R：GTAAAGGTATCTTCTGAACT。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物還包括正向測序引物，其堿基序列為：

V249I-S-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA。

3.如權利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用濃度比為：V249I-F?:?V249I-R=1:1。

4.如權利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正向測序引物V249I-S-F的使用濃度3.2uM。

5.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向擴增引物的擴增反應條件為：第一階段，95?℃?預變性10min；第二階段，變性溫度94?℃?30sec，退火溫度58?℃?90sec，延伸溫度72?℃?30sec，循環35次，第三階段，72?℃?10min；第四階段，擴增反應結束，擴增產物在4?℃下保存。

6.一種檢測CX3CR1基因V249I突變位點的方法，其包括如下步驟：

(1)提取樣本DNA；

(2)利用一對擴增引物V249I-F和V249I-R對(1)中的DNA進行擴增，獲得擴增產物；

(3)利用正向測序引物V249I-S-F對(2)中的擴增產物進行測序，獲得所述擴增產物的基因序列；

(4)將(3)中的基因序列與CX3CR1基因野生型參考序列CX3CR1-ref進行比較，確定突變位點是否存在，其特征在于，

V249I-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA

V249I-R：GTAAAGGTATCTTCTGAACT

V249I-S-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(2)的擴增反應條件為：第一階段，95?℃?預變性10min；第二階段，變性溫度94?℃?30sec，退火溫度64?℃?90sec，延伸溫度72?℃?30sec，循環35次；第三階段，72?℃?10min；第四階段，擴增反應結束，擴增產物在4?℃下保存。