[發明專利]薄層色譜法半定量測定氨基甲酸乙酯的方法

有效

• 申請號: 201410365881.7
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN104142378A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 黃惠華;王浩;周端;劉智鈞;黃秋婷
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明涉及一種檢測氨基甲酸乙酯含量的方法，具體涉及薄層色譜法半定量測定氨基甲酸乙酯含量的方法。

背景技術

氨基甲酸乙酯?(Ethyl?Carbamate，簡稱EC)是一種具有潛在致癌作用的化合物，可導致肝癌、皮膚癌、肺癌和淋巴癌等疾病，是發酵食品和酒精飲料的伴隨產物。EC早在1943年就被證實為致癌物質。1976年，Ough（Ough?C?S.?Ethyl?carbamate?in?fermented?beverages?and?foods.?Ⅱ.?Possible?formation?of?ethyl?carbamate?from?diethyl?dicarbonate?additionto?wine?[J].?Agric?FoodChem,?1976,?24(2):?328-331.）發現在酒精飲料中含有EC。研究表明，對嚙齒類動物，EC是一種多位點致癌物，并且乙醇（酒精）對其致癌性有促進作用。2007年，國際癌癥研究所把EC對人類的致癌毒性由2B組（或可能令人類患癌的物質）改為2A組（可能令人類患癌的物質）。目前氨基甲酸乙酯的污染，被認為是食品中繼黃曲霉毒素之后的又一重要問題，我國尚未制定酒精飲料和發酵食品中氨基甲酸乙酯的限量標準。

自發酵酒精飲料中發現EC以來，國內外都致力于簡便、快速、準確的EC含量檢測方法研究，樣品的前處理方法及檢測方法都在不斷改進。目前國內外對酒精飲料中EC的儀器分析檢測方法有氣相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜法、液相色譜-質譜法、薄層色譜法、傅立葉變換紅外光譜法等，其中最常用的是氣相色譜-質譜法。上述檢測方法準確度高，但存在儀器設備昂貴、前處理方法復雜、人員專業技術要求高、檢測成本高等缺點。因此，建立簡便、快捷、準確的檢測方法成為了酒精飲料中EC檢測迫切需要解決的重要內容。

薄層色譜具有操作簡單、快捷、靈敏度高和準確可靠等特點，廣泛應用于食品營養，合成藥物和藥物代謝，醫學和臨床，毒物分析和法醫化學，農殘檢測等。對于使用薄層色譜法檢測氨基甲酸乙酯，國內外報道并不多見。國內的納新力（納新力,陳介華,代海香.酒中氨基甲酸乙酯的薄層分析[J].衛生研究,1991,20(6):45-46.）運用薄層色譜法在365nm下直接展開，方法的檢測限為10mg/L，國外的Eugenie?Jaryj（Eugenie?Jaryj,?Klemens?Lorenz,?Spangenberg?B.?A?Simple?Method?for?the?Quantification?of?Urethane?in?Spirits[J].?Journal?of?Liquid?Chromatography?&?Related?Technologies.?2008,?31:?1969-1976.）使用薄層色譜法，展開后與EC衍生劑反應，結果可見藍色熒光點。

本發明提供一種用于快速檢測氨基甲酸乙酯的方法。該法基于Eugenie?Jaryj的研究，經過改進后可以使用更加廉價的薄層板，經展開后與肉桂醛衍生劑反應，結果可在普通紫外分析儀365nm,Rf值為0.85處觀察到綠色熒光點，薄層板的最低載藥量為50ng的氨基甲酸乙酯。如果按照酒中氨基甲酸乙酯5mg/L的限定標準，則本發明可以直接檢測出2.5mg/L的EC（薄層板的點樣量一般最大為20μL），因此本發明能夠快速、簡單、廉價檢測出至少2.5mg/L的氨基甲酸乙酯。

發明內容

本發明提供薄層色譜法半定量測定氨基甲酸乙酯的方法。以肉桂醛、磷酸混合液做熒光衍生劑，以甲基叔丁基醚、石油醚、甲醇混合液為流動相展開劑，薄層色譜板為固定相，經薄層展開的氨基甲酸乙酯與熒光衍生劑反應后，在紫外分析儀（365nm處，暗環境）可肉眼觀察到綠色的氨基甲酸乙酯熒光斑點，Rf值固定；

具體步驟為：

（1）取出薄層硅膠板于105℃~110℃烘箱內活化半小時，放入干燥器中備用；

（2）配制展開劑，攪拌后倒入雙槽薄層色譜展開缸中，靜置0.5~1小時，使之飽和；

（3）配制熒光衍生劑溶液：將肉桂醛，丙酮，磷酸混合，攪拌后備用；

（4）在距薄層硅膠板下端1cm處點樣，于同一側面上距薄層硅膠板上端2cm處鉛筆標記作為展開前沿線，點樣樣品為至少含有50ng的氨基甲酸乙酯待測液；

（5）在薄層展開缸中展開，展開劑到達展開前沿線后取出，晾干；

（6）將晾干后的薄層板浸于熒光衍生劑中后取出，之后再在烘箱反應5—20分鐘；