[發明專利]一種制備依諾肝素鈉的工藝

有效

• 申請號: 201410361424.0
• 申請日: 2014-07-28
• 公開（公告）號: CN104086674A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 周翔;金晶;陶翎;費清清
• 申請（專利權）人: 常州千紅生化制藥股份有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫藥和化學領域中的一種藥用化學藥品的制備，具體涉及一種制備依諾肝素鈉的工藝。

背景技術

肝素自上世紀80年代以來一直是預防和治療血栓類藥物的首選藥物，低分子肝素(包括達肝素鈉、依諾肝素、那屈肝素)是由普通肝素通過特異性的化學切割和純化分離制成，自上個世紀末，賽諾菲公司的依諾肝素被美國FDA批準在美國上市以來，低分子肝素由于其療效確切，副作用小而且可預測等優點，逐步取代了傳統肝素的市場地位。依諾肝素可有效預防靜脈血栓栓塞癥和肺栓塞癥，可用于矯形外科、神經外科術前和術后血栓形成，可大大降低患中風風險，能更有效減少不穩定性冠狀動脈綜合癥患者的死亡、心力衰竭、復發性心絞痛等，并可降低高甘油三脂血癥，能有效解決普通未分級肝素及其衍生物長期使用后的出血、骨質疏松、誘導血小板減少等副作用。

由于低分子肝素類多糖藥物由一系列未能完全鑒別的寡糖混合物組成，結構及其復雜，無法依靠單一方法對其進行結構確定，技術難度很高，所以對國內企業來說，形成了進入歐美高附加值終端市場特別是美國市場的一個技術壁壘。

目前，國內有采用酒精分級沉淀、超濾膜分離、分子篩和凝膠過濾層析的方法來控制依諾肝素的分子量，這些方法有個共同的特點就是收率很低，一般只有20％以下，分子量控制精度低，且不同程度的具有費時、費力，自動化程度低的缺點，不適合大規模生產，限制了產能的提升。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備依諾肝素鈉的工藝，該方法通過采用陰離子交換樹脂層析等得到收率高、高純度的依諾肝素鈉產品，且該工藝自動化程度高，操作便捷，為提升產能提供了有力保障，適合大規模生產；克服了現有技術中的費時、費力，自動化程度低，不適合大規模生產，并限制了產能的提升的不足。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：

一種制備依諾肝素鈉的工藝，該制備方法包括以下步驟：

S1：肝素-芐索氯銨鹽的制備：將肝素鈉和芐索氯銨分別溶解于純化水中，得肝素鈉溶解液和芐索氯銨溶解液，室溫攪拌下將肝素鈉溶解液緩慢加入到芐索氯銨溶解液中，加入完畢后繼續室溫下攪拌，收集沉淀物，即為肝素-芐索氯銨鹽，并將其在50℃～60℃真空干燥，得到含水量低于5％的肝素-芐索氯銨鹽；

S2：肝素芐基酯的制備：將步驟S1中得到的肝素-芐索氯銨鹽溶解于二氯甲烷中，在25～45℃下攪拌至充分溶解，加入氯化芐，繼續攪拌反應24～48小時，再將反應液壓入過濾器內，加入醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，靜置，利用壓縮空氣壓濾，甲醇洗滌，沉淀冷凍干燥，得到含水量低于5％、酯化率大于9的肝素芐基酯；

S3：肝素芐基酯的裂解：將步驟S2中得到的肝素芐基酯充分溶解于純化水中，攪拌，并在35～65℃下加入氫氧化鈉，反應1～3小時，冷卻到室溫，調pH到中性，加入氯化鈉，析出油狀物，板框過濾，過膜，加入甲醇析出沉淀，濾板過濾，乙醇洗滌，空氣壓干，得沉淀物；

S4：依諾肝素鈉的脫色：將步驟S3中所述的沉淀物用水充分溶解，調pH到堿性，室溫脫色10～20分鐘，pH調回到中性，準備進行陰離子交換層析；

S5：陰離子交換層析：采用陰離子交換樹脂，按25-35mg低分子肝素鈉/ml-resin上樣，溫度為室溫，檢測波長為UV232nm，上樣結束后先用350～550mmol/L的氯化鈉溶液洗滌，再用1～2mol/L的氯化鈉溶液洗脫，洗脫終點為232nm紫外吸收降至基線平穩，收集洗脫液，檢測分子量分布為重均分子量4000～4600，2000～8000分子量的比例為72-78％；

S6：凍干：酒精沉淀，除菌，凍干，得到所述的依諾肝素鈉。

進一步優選地，步驟S1中，所述肝素-芐索氯銨鹽的獲得方法為：將肝素鈉溶解液緩慢加入到芐索氯銨溶解液中后繼續室溫下攪拌1～5小時，將初步得到的沉淀物離心，反復用純化水洗滌，再離心，直到濾液遇10％的硝酸銀溶液不顯渾濁的沉淀物為所述的肝素-芐索氯銨鹽，然后將其真空干燥，得到最終含水量低于5％的肝素芐索氯銨鹽。

進一步優選地，步驟S2中，肝素芐基酯的具體制備方法為：將步驟S1中得到的肝素-芐索氯銨鹽按1∶1～5溶解于二氯甲烷中，開啟機械攪拌，在25～45℃下攪拌至充分溶解，加入1～5倍量的氯化芐，繼續保持25～45℃，攪拌反應24～48小時，將反應液壓入三合一濾器，邊攪拌邊加入醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，靜置，利用壓縮空氣壓濾，甲醇洗滌，反復幾次直至濾液遇水無乳化現象，沉淀冷凍干燥24小時，得到肝素芐基酯，含水量低于5％，酯化率大于9。