[發明專利]一種制備依諾肝素鈉的工藝

有效

• 申請號: 201410361424.0
• 申請日: 2014-07-28
• 公開（公告）號: CN104086674A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 周翔;金晶;陶翎;費清清
• 申請（專利權）人: 常州千紅生化制藥股份有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：該制備方法包括以下步驟：

S1：肝素-芐索氯銨鹽的制備：將肝素鈉和芐索氯銨分別溶解于純化水中，得肝素鈉溶解液和芐索氯銨溶解液，室溫攪拌下將肝素鈉溶解液緩慢加入到芐索氯銨溶解液中，加入完畢后繼續室溫下攪拌，收集沉淀物，即為肝素-芐索氯銨鹽，并將其在50℃～60℃真空干燥，得到含水量低于5％的肝素-芐索氯銨鹽；

S2：肝素芐基酯的制備：將步驟S1中得到的肝素-芐索氯銨鹽溶解于二氯甲烷中，在25～45℃下攪拌至充分溶解，加入氯化芐，繼續攪拌反應24～48小時，再將反應液壓入過濾器內，加入醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，靜置，利用壓縮空氣壓濾，甲醇洗滌，沉淀冷凍干燥，得到含水量低于5％、酯化率大于9的肝素芐基酯；

S3：肝素芐基酯的裂解：將步驟S2中得到的肝素芐基酯充分溶解于純化水中，攪拌，并在35～65℃下加入氫氧化鈉，反應1～3小時，冷卻到室溫，調pH到中性，加入氯化鈉，析出油狀物，板框過濾，過膜，加入甲醇析出沉淀，濾板過濾，乙醇洗滌，空氣壓干，得沉淀物；

S4：依諾肝素鈉的脫色：將步驟S3中所述的沉淀物用水充分溶解，調pH到堿性，室溫脫色10～20分鐘，pH調回到中性，準備進行陰離子交換層析；

S5：陰離子交換層析：采用陰離子交換樹脂，按25-35mg低分子肝素鈉/ml-resin上樣，溫度為室溫，檢測波長為UV232nm，上樣結束后先用350～550mmol/L的氯化鈉溶液洗滌，再用1～2mol/L的氯化鈉溶液洗脫，洗脫終點為232nm紫外吸收降至基線平穩，收集洗脫液，檢測分子量分布為重均分子量4000～4600，2000～8000分子量的比例為72-78％；

S6：凍干：酒精沉淀，除菌，凍干，得到所述的依諾肝素鈉。

2.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：步驟S1中，所述肝素-芐索氯銨鹽的獲得方法為：將肝素鈉溶解液緩慢加入到芐索氯銨溶解液中后繼續室溫下攪拌1～5小時，將初步得到的沉淀物離心，反復用純化水洗滌，再離心，直到濾液遇10％的硝酸銀溶液不顯渾濁的沉淀物為所述的肝素-芐索氯銨鹽，然后將其真空干燥，得到最終含水量低于5％的肝素芐索氯銨鹽。

3.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：步驟S2中，肝素芐基酯的具體制備方法為：將步驟S1中得到的肝素-芐索氯銨鹽按1∶1～5溶解于二氯甲烷中，開啟機械攪拌，在25～45℃下攪拌至充分溶解，加入1～5倍量的氯化芐，繼續保持25～45℃，攪拌反應24～48小時，將反應液壓入三合一濾器，邊攪拌邊加入醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，靜置，利用壓縮空氣壓濾，甲醇洗滌，反復幾次直至濾液遇水無乳化現象，沉淀冷凍干燥24小時，得到肝素芐基酯，含水量低于5％，酯化率大于9。

4.根據權利要求3所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：加入等體積的10％醋酸鈉甲醇溶液。

5.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：在步驟S3中，將肝素芐基酯按1∶1～30的重量比加入至純化水中并充分溶解。

6.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：將步驟S3中充分溶解于純化水中的肝素芐基酯在35～65℃的攪拌條件下加入5％～12％氫氧化鈉固體的溶解液，反應完畢后接上冷媒管迅速冷卻到室溫。

7.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：所述過膜為過0.45μm的膜。

8.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：步驟S4中，通過加入0.5～1.5％的雙氧水在室溫下進行脫色。

9.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：步驟S6中所述酒精沉淀是向洗脫液中加入兩倍酒精進行沉淀，開啟冷媒，靜置過夜，第二天棄去上清液，沉淀再加一倍酒精進行脫水，棄去上清，加入一定量的純化水進行溶解。

10.根據權利要求1所述的制備依諾肝素鈉的工藝，其特征在于：步驟S6中所述的除菌為通過除菌膜進行除菌。