[發(fā)明專利]林蛙提取混合液及其在治療及預(yù)防腳氣的藥物中的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410360106.2
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104173382A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 滕樂生;李佺;謝晶;劉艷;逯家輝;孟慶繁;張杰;劉瑜;劉博通;滕利榮
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61K9/06;A61K9/12;A61K9/08;A61P17/00;A61P31/10;A47K10/16
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責(zé)任公司 22201
• 代理人: 張景林;王恩遠(yuǎn)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種林蛙提取混合液及其在制備治療及預(yù)防腳氣的藥物中的用途。

背景技術(shù)

腳氣，是一種極常見的皮膚病。成人中70～80％的人患有腳氣，只是輕重不同而已。常在夏季加重，冬季減輕，也有人終年不愈。致病菌多系毛癬菌屬與表皮癬菌種，主要菌種有紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、絮狀表皮癬菌、玫瑰色毛癬菌。腳氣不易治愈的主要原因除去這些真菌有較強的耐藥性之外，在治療過程中，病患處的濕潤、厭氧環(huán)境又是其剩余真菌的有力溫床；同時患者體內(nèi)含有真菌，當(dāng)外用停止給藥時，體內(nèi)的真菌可繼續(xù)繁殖，導(dǎo)致了腳氣的反復(fù)發(fā)作，很難根治。

目前，國內(nèi)對林蛙皮抗菌肽進(jìn)行了研究，申報的專利也在增多，以林蛙為關(guān)鍵詞，檢索國內(nèi)外專利，沒有查到國外關(guān)于林蛙的專利，國內(nèi)專利中CN1216768A“生物抗菌肽及其制備方法”是涉及一種具有廣譜抗菌活性的林蛙蛙皮生物抗菌肽及其制備方法；CN1583166A“林蛙抗菌肽噴霧劑及其制備方法”、CN1583165A“林蛙抗菌肽凝膠劑及其制備方法”是涉及保護(hù)林蛙皮膚抗菌肽以噴霧劑和凝膠劑兩種形式用于臨床皮膚感染、燒傷燙傷感染領(lǐng)域；CN1679632A“林蛙鎮(zhèn)痛水提物及其制備方法及其制備方法”是關(guān)于保護(hù)從林蛙皮中提取的一種具有鎮(zhèn)痛作用的林蛙鎮(zhèn)痛水提物及其制備技術(shù)。均是以林蛙皮為原料，提取了林蛙皮抗菌肽。CN103073628A一種利用超聲波從林蛙體中提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法是以林蛙體為原料采用超聲提取抗菌肽，提取的抗菌肽是分子量為4KDa最適pH值為3.5，等電點pI值為8.0一10.5的堿性多肽。以上專利均以抗菌肽為保護(hù)內(nèi)容，申請保護(hù)其在抗菌方面的作用，所述抗菌是指抵抗細(xì)菌和真菌包括大腸桿菌、綠膿桿菌等革蘭氏陰性菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌及臨床耐藥菌克雷伯桿菌、鮑曼不動桿菌、白色念珠菌、酵母菌的一種或多種；并且抗菌治療途徑均為外用給藥。CN103432058A“林蛙膠原蛋白液及其制備工藝”是以林蛙皮提取物、西洋參皂甙、五味子浸出液、蘆薈提取物和水配制而成；CN102492760A“一種利用復(fù)合酶生產(chǎn)活性東北林蛙膠原蛋白低聚肽的方法”是以干東北林蛙皮為原料；CN102229972A“制備林蛙皮膠原蛋白肽的方法”是以林蛙皮為原料，以上三個專利均是以林蛙皮為原料或主要原料提取林蛙皮中所含的膠原蛋白。

現(xiàn)有技術(shù)中的提取方法均未提取林蛙含有的多糖和鈣離子，且僅單純提取林蛙抗菌肽，或單純提取林蛙膠原蛋白，最主要的是提取的抗菌肽或膠原蛋白的分子量范圍不固定，差值較大，未有詳細(xì)說明，未將有效成分合理利用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種林蛙提取混合液，其是由如下步驟制備得到：

(1)將10～45重量份林蛙干除雜除塵后分別經(jīng)20～100目粉碎，使林蛙干粉碎物的粒徑在500μm以下，按照1g：1～10mL的比例加入復(fù)合酶水解液，復(fù)合酶水解液中含木瓜蛋白酶1～5wt％、胰蛋白酶2～4wt％，風(fēng)味蛋白酶1～3wt％，酶解溫度為50～55℃，酶解時間為1～2h，酶解pH為7.0～7.5，而后85～90℃下滅酶5～15min，將混合物在溫度10～30℃時離心，離心時間為1～5min，離心轉(zhuǎn)速為2000～4000rpm，取離心后混合液體積20～40％的上層上清液，此時上層上清液中含有林蛙干短肽膠原蛋白(由于離心力的作用，短鏈膠原蛋白將集中在上層上清液中，長鏈蛋白分子將會集中在混合液的中下層剩余混合物中)，其分子量為2～3KDa，等電點pI值為7.5～7.8，其中堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸、組氨酸)占上層上清液的11.04～12.89％(質(zhì)量比)，酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)占上層上清液的17.99～19.13％(質(zhì)量比)。

取上清后剩余混合物(原體積的60～80％)放入膠體磨，研磨2～15min，使混合物的平均粒徑在300μm以下；將混合物放入高剪切分散乳化機內(nèi)，剪切1～15min，使混合物平均粒徑在100～200μm之間，將混合物進(jìn)行噴霧干燥成粉末狀，此時得到林蛙干提取短肽膠原蛋白后剩余纖維、骨質(zhì)等物質(zhì)的超微粉；