[發明專利]一種重組蛋白rPmt4p及其表達與在制備防治侵襲性白念珠菌感染疫苗中的應用

有效

• 申請號: 201410359895.8
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104140460A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 閻瀾;王麗;王曉娟;姜遠英
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K14/40
• 分類號: C07K14/40;A61K39/00;A61P31/10;C12N15/81;C12R1/725;C12R1/865
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

1.一種重組蛋白rPmt4p，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.一種如權利要求1所述的重組蛋白rPmt4p在制備預防或治療侵襲性白念珠菌感染疫苗中的應用。

3.一種預防或治療侵襲性白念珠菌感染的蛋白疫苗，其特征在于，該蛋白疫苗的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

4.一種如權利要求3所述的預防或治療侵襲性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制備方法，包括以下步驟：

A、克隆如SEQ?ID?NO:2所示的DNA序列；

B、構建含有如SEQ?ID?NO:2所示的DNA序列的重組質粒；

C、在真核表達系統釀酒酵母INVSc1中表達如SEQ?ID?NO:1所示的重組蛋白。

5.根據權利要求4所述的預防或治療侵襲性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制備方法，其特征在于，步驟A中，克隆以白念珠菌SC5314基因組DNA為模板，設計并合成引物如下：

PMT4-Exp-F如SEQ?ID?NO:3所示；

PMT4-Exp-R如SEQ?ID?NO:4所示。

6.根據權利要求4所述的預防或治療侵襲性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制備方法，其特征在于，步驟B中，構建所用的質粒為PYES2/CT質粒。

7.根據權利要求4所述的預防或治療侵襲性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制備方法，其特征在于，將步驟(A)中獲得的DNA序列插入到PYES2/CT質粒中，構建PYES2/CT-PMT4重組質粒，將上述重組質粒轉化感受態細胞DH-5α，重組質粒酶切鑒定正確后送測序，序列如SEQ?ID?NO:2所示；

將酶切和測序結果都為陽性的重組質粒轉染到表達菌株釀酒酵母INVSc1中；

菌落PCR、基因組PCR鑒定陽性轉染克?。?/p>

鑒定為陽性的克隆在SC-ura^-的液體培養基中誘導表達目的重組蛋白。