[發明專利]膀胱腫瘤相關抗原檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410359816.3
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104142401A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 于暉;李雨心;陳勤慧;王旭;劉洋
• 申請（專利權）人: 北京普恩光德生物科技開發有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;程云

技術領域

本發明屬于分子免疫學領域，具體涉及檢測樣本中膀胱腫瘤相關抗原含量的試劑盒。

背景技術

膀胱癌是我國最常見的泌尿系腫瘤，大約90％的膀胱癌為膀胱尿路上皮癌。膀胱癌的復發率很高，60％-70％的患者可能復發，11％復發的患者可進展為浸潤性腫瘤。目前對于膀胱癌診斷及隨訪主要依賴于膀胱鏡檢查和尿細胞學檢查，患者依從性差，價格比較昂貴，不易作為常規鏡檢；患者雖然特異度高且無創，但對低度表淺性的腫瘤敏感性低，容易產生假陰性的結果。因此，尋找敏感度及特異度高的膀胱腫瘤標志物作為膀胱癌的早期診斷、檢測以及預后評估受到越來越多的關注。

膀胱腫瘤是泌尿系統最常見的腫瘤，其中以膀胱移行細胞癌(bladder?transitional?cell?carcinoma，BTCC最多見)。BTCC生物學行為復雜多變，表現為易復發、多發、浸潤和轉移，所以這些因素容易影響到對膀胱癌的診斷和治療。目前，膀胱癌的診斷主要依靠尿脫落細胞學和膀胱鏡檢查，膀胱鏡檢查屬于侵入性檢查，患者較痛苦，某些情況下尚有導致尿路感染的可能性，因而不適用于膀胱癌的群體性篩查。其他檢查方法，如尿脫落細胞學檢查雖然特異度高，但是靈敏度較差，容易受到尿路感染等因素的干擾。一般來講，一種新的臨床早期診斷和檢測方法應該具有非侵入性的特點，同時具有較好的靈敏度和特異度，并且兼顧操作簡便，使用成本低。因此，尋找靈敏度高、特異度強，并且便于群體性篩查的無創性檢查方法是近年來膀胱癌臨床研究的熱點。

建立一種簡便快速、特異度強并且不具有侵入性的檢查方法有利于膀胱癌的早期診斷，對善預后以及檢測復發都具有重要意義。

發明內容

根據一些實施方式，提供了一種檢測樣本中膀胱腫瘤相關抗原的試劑盒，其包含：

包被有第一膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體的多孔板、

樣品稀釋液、

酶工作液、

化學發光液。

在一些實施方案中，包被有第一膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體的多孔板中第一膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.9317或9318的雜交瘤細胞所產生。

當多孔板上的單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.9317的雜交瘤細胞所產生時，則酶工作液中的單克隆抗體由本發明的另一株雜交瘤細胞產生；反之亦然，當多孔板上的單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.9318的雜交瘤細胞所產生時，則酶工作液中的單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.9317的雜交瘤細胞產生。

在一些實施方案中，樣品稀釋液包含氯化鈉、山羊血清、吐溫-20、和防腐劑。在具體實施方案中，樣品稀釋液包含30g/L氯化鈉、25ml/L山羊血清、5ml/L吐溫-20和0.5ml/L?Proclin-300。樣本稀釋液可以配制成濃縮型，也可以不是。技術人員可以理解，其它濃縮倍數也包括在本發明范圍內。

在一些實施方案中，酶工作液包含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉、小牛血清、辣根過氧化物酶標記的第二膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體和防腐劑。在一些實施方案中，第二膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.9318或9317的雜交瘤細胞所產生。在具體實施方案中，酶工作液包含5.8g/L磷酸氫二鈉、0.593g/L磷酸二氫鈉、8.0g/L氯化鈉、200ml/L小牛血清、0.5ml/L?Proclin-300和0.4?mg/L辣根過氧化物酶標記的第二膀胱腫瘤相關抗原單克隆抗體。

在一些實施方案中，化學發光液包含化學發光液A和化學發光液B。所述化學發光液A含有魯米諾和發光增強劑。化學發光液B含有過氧化物和發光增強劑。

應當理解，本發明的各試劑可以配制成濃縮型，也可以不是。在一些實施方案中，一些試劑配制成濃縮型，這可以減少運輸、儲存體積。技術人員可以理解，除了具體實例以外的其它濃縮倍數也包括在本發明范圍內。

在一些實施方案中，樣本來自哺乳動物，優選來自人類。樣本選自全血、血漿、和血清。在具體實施方案中，樣本為人尿液。

在一些實施方案中，本發明的試劑盒還可以根據需要包括校準品。校準品用于標準曲線的繪制。在具體實施方案中，校準品包含已知濃度的膀胱腫瘤相關抗原純品，膀胱腫瘤相關抗原的濃度在10ng/ml至4000ng/ml范圍內。在具體實施方案中，校準品中膀胱腫瘤相關抗原的分別濃度為400、200、50、10、5、0?ng/ml。技術人員理解，其它濃度同樣適用，例如只需三個濃度點就足以建立一條標準曲線。