[發明專利]BCR?ABL融合蛋白突變體及其編碼基因、表達載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201410359268.4
• 申請日: 2014-07-25
• 公開（公告）號: CN104212821B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發明（設計）人: 馮文莉;劉鑫;文良雪;黃崢蘭;李會
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/63;C12N15/66;C12N9/12;A61K48/00;A61K38/45;A61P35/02
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所(普通合伙)50211
• 代理人: 郭云

1.一種BCR-ABL融合蛋白突變體編碼基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。?

2.一種含有權利要求1所述核苷酸序列的表達載體。?

3.根據權利要求2所述的表達載體，其特征在于：所述表達載體為將權利要求1所述的核苷酸序列插入穿梭質粒pAd-Track-CMV后與骨架質粒pAd-Easy-1重組得到。?

4.一種構建權利要求2或3所述的表達載體的方法，其特征在于：該構建方法包括如下步驟：?

(1)采用重疊延伸PCR方法進行擴增得到核苷酸序列SEQ?ID?NO:1的片段，包括三個反應體系：PCR1，PCR2和PCR3；PCR1以野生型ABLSH3為模板，上下游引物為F/Rm3；PCR2以野生型ABLSH3為模板，上下游引物為R/Fm3；PCR3以PCR1和PCR2的反應產物作為模板，上下游引物為F/R；所述引物序列為：?

F:5'-GCGTCGACAACCTTTTCGTTGCACTGTATGATT-3',?

R:5'-CCGCTCGAGTCATGGCGTGATGTAGTTGCTTGG-3',?

Rm3:5'-ATTCCCCATTGTGAATATAGCCTAAGACCC-3,?

Fm3:5'-GTGGAGATAACtatCTAAGCATAACTAA-3'；?

(2)將步驟1得到的核苷酸序列為SEQIDNO:1的片段和穿梭質粒pAd-Track-CMV經限制性內切酶Sal?Ⅰ和Xho?Ⅰ雙酶切后，連接構建重組質粒；?

(3)將步驟2得到的重組質粒經EcoR?I酶切后與骨架質粒pAd-Easy-1連接構成重組腺病毒載體。?

5.一種BCR-ABL融合蛋白突變體，其特征在于：所述的突變體是基于BCR-ABL/c-ABLSH3結構域位點突變而設計，位于ABL?SH3結構79位的蘇氨酸突變為酪氨酸，所述BCR-ABL融合蛋白突變體氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2。?

6.權利要求1所述的核苷酸序列在制備多種治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。?

7.權利要求2或3所述的表達載體在制備多種治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。?

8.權利要求5所述的融合蛋白突變體在制備多種治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。?