[發明專利]一種褐藻膠裂解酶基因algp及其制備方法與表達

有效

• 申請號: 201410353590.6
• 申請日: 2014-07-23
• 公開（公告）號: CN105296454B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 周祥山;沈偉;蔡孟浩;張元興
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/63;C12P19/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明涉及一種褐藻膠裂解酶基因algp及其制備方法與表達。揭示了一種海洋弧菌來源的褐藻膠裂解酶，其蛋白穩定性好，生物活性高。本發明還公開了褐藻膠裂解酶基因algp、含有褐藻膠裂解酶基因algp的載體和宿主細胞，以及重組表達褐藻膠裂解酶的方法。本發明的技術方案可以實現以較低的成本大量生產重組褐藻膠裂解酶。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，更具體地，本發明涉及一種褐藻膠裂解酶基因algp及其制備方法與表達。

背景技術

廣袤無垠的海洋占據著地球71％的面積，是一個巨大的寶庫，蘊藏的巨量的生物資源。海藻是其中一種重要的海洋植物，它是無機物的天然富集器，也是許多海洋活性物質的制造者。海藻多糖就是海藻中的一大類重要活性物質，目前國際上應用最廣泛最多的海藻多糖是褐藻膠，卡拉膠和瓊膠。

褐藻膠是源自于褐藻植物的細胞壁的水溶性酸性多糖，其主要由α-L-古羅糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸組成。隨著研究的發現，褐藻膠的降解產物具有特別的化學活性與生物活性，在醫藥衛生、食品工業及化妝品行業等均存在巨大的應用價值。制備褐藻膠降解產物有多種方法，如酸法降解、超聲降解、氧化降解、酶降解法等。其中酶法降解相較于化學法制備反應溫和、易于控制，耗能低，產物回收率較高以及不會產生嚴重的污染等優點，更多的研究聚焦于酶法降法制備褐藻膠低聚糖。

但是，目前由于大多數產褐藻膠裂解酶的菌株的活性較低，產量較低，阻礙了褐藻膠低聚糖的制備，進一步阻礙了研究與應用的深入進展。

因此，開發活性高、產量高的褐藻膠裂解酶、提高產褐藻膠裂解酶的菌株的活性成為了本技術領域的當務之急。

發明內容

本發明的目的在于提供一種褐藻膠裂解酶基因algp及其制備方法與表達。

在本發明的第一方面，提供一種褐藻膠裂解酶，其是：

(a)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽；或

(b)將SEQ ID NO:2所示氨基酸序列經過一個或多個(如1-20個；較佳地1-10個；更佳地1-5個)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)多肽活性的由(a)衍生的多肽；

(c)氨基酸序列與(a)限定的多肽的氨基酸序列有90％以上(較佳地95％以上；更佳地98％以上；更佳地99％以上)相同性且具有(a)多肽活性的多肽；或

(d)具有(a)多肽功能的SEQ ID NO:2的蛋白片段。

在一個優選例中，所述的褐藻膠裂解酶來源于海洋弧菌(Vibrio sp.)QY102。

在本發明的另一方面，提供一種分離的多核苷酸，該多核苷酸編碼所述的褐藻膠裂解酶的多核苷酸。

在一個優選例中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在本發明的另一方面，提供一種表達載體，它含有所述的多核苷酸。

在一個優選例中，所述的表達載體來源于pet28。

在本發明的另一方面，提供一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有所述的載體，或基因組中整合有所述的多核苷酸。

在一個優選例中，所述的宿主細胞是原核細胞，較佳地為大腸桿菌細胞，更佳地為HMS174(DE3)。

在本發明的另一方面，提供所述的褐藻膠裂解酶的用途，用于酶解褐藻膠。

在本發明的另一方面，提供一種生產褐藻膠裂解酶的方法，包括步驟：

(1)培養所述的宿主細胞，獲得培養物；和

(2)從培養物中分離褐藻膠裂解酶。