[發(fā)明專利]一種褐藻膠裂解酶基因algp及其制備方法與表達(dá)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410353590.6
• 申請(qǐng)日: 2014-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN105296454B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周祥山;沈偉;蔡孟浩;張?jiān)d
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/88
• 分類號(hào): C12N9/88;C12N15/60;C12N15/63;C12P19/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種褐藻膠裂解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一種分離的多核苷酸，該多核苷酸編碼權(quán)利要求1所述的褐藻膠裂解酶。

3.如權(quán)利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.一種表達(dá)載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求2所述的多核苷酸。

5.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它含有權(quán)利要求4所述的載體，或基因組中整合有權(quán)利要求2所述的多核苷酸。

6.權(quán)利要求1所述的褐藻膠裂解酶的用途，用于酶解褐藻膠。

7.一種生產(chǎn)褐藻膠裂解酶的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)培養(yǎng)權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，獲得培養(yǎng)物；和

(2)從培養(yǎng)物中分離褐藻膠裂解酶。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的宿主細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞，所述的方法包括：

使所述宿主細(xì)胞在5L發(fā)酵罐中采用發(fā)酵培養(yǎng)基生長(zhǎng)，生長(zhǎng)到OD₆₀₀＝3±0.5時(shí)，開始補(bǔ)稀料，根據(jù)溶氧反饋緩慢提升補(bǔ)料速率，待1±0.2L稀料補(bǔ)完換成濃料進(jìn)行補(bǔ)料；整個(gè)發(fā)酵過程控制溶氧在30±10％；菌體生長(zhǎng)到OD₆₀₀＝40±3時(shí)暫停補(bǔ)料，此時(shí)溶氧迅速回升，待停補(bǔ)料約10min后進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)，添加IPTG后維持30±5min后再進(jìn)行補(bǔ)料，待菌體生長(zhǎng)緩慢、酶活不再增長(zhǎng)后停止發(fā)酵；其中，所述的稀料的組分為：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，甘油60g/L，MgSO₄ 1.25g/L；所述的濃料的組分為：蛋白胨80g/L，酵母粉40g/L，甘油240g/L，MgSO₄ 5g/L，所述各組分的用量在所指定數(shù)值基礎(chǔ)上在±20％浮動(dòng)。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為：酵母粉2g/L，甘油5g/L，泡敵60μl/L，Na₂HPO₄ 6g/L，KH₂PO₄ 3g/L，NH₄Cl 1g/L，NaCl 0.5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂溶液2ml/L，微量元素2ml/L；所述各組分的用量在所指定數(shù)值基礎(chǔ)上在±20％浮動(dòng)。

10.一種用于酶解褐藻膠的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中包含權(quán)利要求1所述的褐藻膠裂解酶。