[發(fā)明專利]一種測定水產(chǎn)品中的孔雀石綠酶聯(lián)免疫吸附法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410353133.7
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN105277692A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪霞;鄧榕榕;杜霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種水產(chǎn)品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)溶液的配制

a.包被液的配制：將碳酸鈉、碳酸氫鈉配制成pH7.0-8.0的溶液，低溫保存；

b.洗滌液的配制：將氯化鈉、十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀及吐溫20配制成pH7-8的溶液，低溫保存；

c.終止液的配制：配制10-15％的濃硫酸；

d.封閉液的配制：將氯化鈉、十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、吐溫20及牛血清白蛋白配制成pH7-8的溶液，低溫保存；

e.底物溶液的配制：將磷酸氫二鈉、檸檬酸、H₂O₂及四甲基聯(lián)苯胺配制成溶液；

(2)抗體固定

將孔雀石綠多克隆抗體用包被液稀釋，以每孔100μL加入酶標(biāo)板中，同時(shí)設(shè)立正常血清稀釋液的陽性對照，低溫過夜保存；將孔中液體倒盡，加入洗滌液，保留3min，再倒盡，如此重復(fù)洗滌多次；每孔中添加100μL封閉液，37℃，保留1h；將孔中液體倒盡，加入洗滌液，保留3min，再倒盡，如此重復(fù)洗滌多次；

(3)免疫反應(yīng)

用封閉液稀釋待測樣品溶液后加入酶標(biāo)板孔中，100μL/孔，37℃，保留1-2h，孔中液體倒掉，加入洗滌液，保留3min，倒盡，如此重復(fù)洗滌多次；用封閉液稀釋酶標(biāo)孔雀石綠溶液后加入孔中，100μL/孔，37℃，保留1-2h，孔中液體倒掉，加入洗滌液，保留3min，倒盡，如此重復(fù)洗滌多次；加入底物溶液，100μL/孔，避光，37℃，10-15min；加入終止液終止反應(yīng)，100μL/孔；

(4)檢測信號的獲得

a.用酶標(biāo)儀檢測酶標(biāo)板孔中的液體OD值，根據(jù)OD值判斷樣品中孔雀石綠的含量，根據(jù)孔雀石綠含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出樣品中孔雀石綠的含量大??；

b.按照權(quán)利要求1所述的水產(chǎn)品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是：所述重復(fù)洗滌的次數(shù)為三次；

c.按照權(quán)利要求1所述的水產(chǎn)品中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征是：所述低溫為4℃。