[發明專利]枳殼中兩種黃酮的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201410348362.X
• 申請日: 2014-07-22
• 公開（公告）號: CN104280497A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 金永日;李緒文;李敏;楊潔;李蘭杰;臧慧明;陳妍心
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 長春市四環專利事務所(普通合伙) 22103
• 代理人: 郭耀輝

技術領域

本發明涉及枳殼中5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮的質量檢測方法，屬于生物醫藥領域。

背景技術

枳殼(Aurantii?Fructus)為蕓香科柑橘屬植物酸橙(Citrus?aurantium?L.)及其栽培變種的干燥未成熟果實。枳殼氣清香，味苦、微酸，用于治療食積不化，臟器下垂等癥狀，具有理氣寬中、行滯消脹等功效，是一種用途廣泛的中藥材，已被多版中國藥典收載。

枳殼中的化學成分主要由黃酮、生物堿、香豆素及揮發油等類化合物組成。

盡管國內外學者廣泛的研究了枳殼的化學成分及其藥理作用，但是仍存在尚不明確的化學成分，枳殼藥材的質量標準還有待完善，枳殼的醫藥用途還有待進一步開發利用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有的缺陷，在對枳殼化學成分進行深入研究的基礎上提供一種能夠快速檢測枳殼中化學成分含量的RP-HPLC法。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

枳殼中兩種黃酮的質量檢測方法，所述質量檢測方法為高效液相色譜法，色譜條件和檢測條件如下：

流動相：甲醇-水，體積比為(45—60)：(40—55)

流速：0.5-1.5mL·min^-1

柱溫：25.0℃

進樣量：10-30μL

檢測波長：200—400nm；

供試品溶液的制備：精密稱取枳殼藥材粉末(50-100目篩)適量，以甲醇作為提取溶劑，溶劑用量為藥材質量的10倍(g/ml)，回流提取2-4次，提取時間均為0.5-1.5h，將提取液合并，過濾，濃縮至干，用色譜甲醇溶解并定容至指定體積，過微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密稱取對照品5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮適量，置于容量瓶中，用色譜甲醇定容配制成濃度均為0.10-0.30mg·mL^-1的混合對照品溶液。

進一步地，上述的質量檢測方法，色譜條件和檢測條件如下：

色譜儀：Agilent1200HPLC，二極管陣列檢測器

色譜柱：Acchrom?Unitary?C18Column(4.6×250mm，5μm)

流動相：甲醇-水，體積比為52：48

流速：1.0mL·min^-1

柱溫：25.0℃

進樣量：20μL

檢測波長：310nm。

更進一步地，上述的質量檢測方法中，

供試品溶液的制備：精密稱取枳殼藥材粉末(80目篩)適量，以甲醇作為提取溶劑，溶劑用量為藥材質量的10倍(g/ml)，回流提取3次，提取時間分別為1.5h、1.0h、0.5h，將提取液合并，過濾，濃縮至干，用色譜甲醇溶解并定容至指定體積，過0.22μm微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液。

更進一步地，上述的質量檢測方法中，

對照品溶液的制備：精密稱取對照品5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮2.64mg和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮2.54mg，置于同一個10mL的容量瓶中，用色譜甲醇定容配制成濃度分別為0.26mg·mL^-1和0.25mg·mL^-1的混合對照品溶液。

本發明所用到的對照品5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮均為自制，其中，5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮的純度為98.7％，5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮的純度為97.9％。5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮的制備方法如下：

(1)提取

取干燥的枳殼藥材，粉碎，采用加熱回流的方式提取，提取溶劑為乙醇，提取2-4次，然后合并提取液，過濾，減壓濃縮，得到粗提取物；

(2)分離

將粗提取物，用流動相1作為洗脫液進行硅膠柱層析分離，TCL檢驗流份，收集合并組分相同的流份，回收溶劑，得到2個部分，其中第二部分含較大量的5,6,7,3′,4′-五甲氧基黃酮和5,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮；

(3)純化