[發明專利]對細胞基因組的預定位點進行基因改造的方法

在審

• 申請號: 201410346231.8
• 申請日: 2014-07-18
• 公開（公告）號: CN104152414A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 李卓;裴端卿
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/09;C12N15/63
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種重組細胞，其特征在于，所述細胞過表達：

第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼Cas9蛋白或其衍生物，所述Cas9蛋白的衍生物與所述Cas9蛋白相比，缺失DNA切割活性，但保留靶點識別活性。

2.根據權利要求1所述的重組細胞，其特征在于，所述第一核酸分子定位于所述細胞基因組中的H3F3A基因中。

3.根據權利要求1所述的重組細胞，其特征在于，所述細胞過表達：

第二核酸分子，所述第二核酸分子編碼tracrRNA。

4.根據權利要求3所述的重組細胞，其特征在于，所述第一核酸分子具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列，所述第二核酸分子具有SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。

5.根據權利要求3所述的重組細胞，其特征在于，所述第二核酸分子定位于所述細胞基因組中的H3F3A基因中。

6.根據權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，沿著5’端至3’端的方向，所述第一核酸分子位于所述第二核酸分子的上游。

7.根據權利要求1所述的重組細胞，其特征在于，所述Cas9蛋白的衍生物與所述Cas9蛋白相比具有下列突變至少之一：D10A和H840A。

8.根據權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述基因組過表達基因表達調控元件。

9.根據權利要求8所述的重組細胞，其特征在于，所述基因表達調控元件為SID4X或VP64。

10.根據權利要求9所述的重組細胞，其特征在于，沿著5’端至3’端的方向，所述第一核酸分子位于所述SID4X的下游。

11.根據權利要求9所述的重組細胞，其特征在于，沿著5’端至3’端的方向，所述第一核酸分子位于所述VP64的上游。

12.一種用于對細胞進行基因改造的試劑，其包含：

Che-chiRNA；或者

Che-gRNA以及任選地Che-tracrRNA。

13.根據權利要求12所述的試劑，其特征在于，Che-chiRNA包含序列：

5’-(N)₂₀GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAU-3’，N＝A、U、G或C。

14.根據權利要求12所述的試劑，其特征在于，Che-gRNA包含序列：

5’-(N)₂₀GUUUUAGAGCUA-3’，N＝A、U、G或C。

15.根據權利要求12所述的試劑，其特征在于，Che-chiRNA、Che-gRNA以及Che-tracrRNA的至少之一是化學合成的。

16.一種對細胞基因組的預定位點進行基因改造的方法，其特征在于，包括：

提供權利要求1～11任一項所述的重組細胞；以及

將權利要求12～15任一項所述的試劑引入到所述重組細胞中，

其中，所述Che-chiRNA或Che-gRNA的基序(N)₂₀是基于所述預定位點的序列設計的。

17.根據權利要求16所述的方法，其特征在于，所述基因改造包括對預定位點進行基因敲除或表達調控。