[發(fā)明專利]一種可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭及檢測(cè)方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410345866.6
• 申請(qǐng)日: 2014-07-18
• 公開（公告）號(hào): CN104178566A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙建;朱新平;李偉;王亞坤;文萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國(guó)華

1.一種可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭，其特征是：包括4條接頭，分別為接頭1、接頭2、接頭3和接頭4，接頭1～4的核苷酸序列如SEQ?ID：1～4中所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭，其特征是：對(duì)于5色熒光系統(tǒng)，選用4條接頭，對(duì)于4色熒光系統(tǒng)，選用4條接頭中的3條接頭即可。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭，其特征是：所述4條接頭可與4種不同的熒光任意組合。

4.一種利用權(quán)利要求1所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是包括以下步驟：

(1)選取樣品，提取樣品的基因組DNA；

(2)合成多個(gè)微衛(wèi)星引物的接頭-正向引物、反向引物及熒光標(biāo)記接頭；

(3)將每個(gè)微衛(wèi)星引物的接頭-正向引物與反向引物混合，再將各個(gè)微衛(wèi)星引物混合，得混合引物，在混合引物中加入熒光標(biāo)記接頭，作為多重PCR的引物；

(4)將多重PCR的引物加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行正常多重PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用ABI遺傳分析儀進(jìn)行分析，獲得樣品的各微衛(wèi)星位點(diǎn)的擴(kuò)增圖譜。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是：步驟(2)中對(duì)于5色熒光系統(tǒng)，所述熒光標(biāo)記接頭為4條熒光標(biāo)記接頭，所述熒光為FAM、VIC、PET和NED四色熒光，對(duì)于4色熒光系統(tǒng)，所述熒光標(biāo)記接頭為3條熒光標(biāo)記接頭，所述熒光為FAM、JOE和NED三色熒光。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是：步驟(2)中在標(biāo)記同一熒光的正向引物前連接同一接頭，以避免每個(gè)正向引物都需要進(jìn)行熒光標(biāo)記。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是：步驟(3)中將每個(gè)微衛(wèi)星引物的接頭-正向引物與反向引物按1：40的摩爾比混合。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是：步驟(3)中所述熒光標(biāo)記接頭的摩爾用量與反向引物的摩爾用量相同。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭進(jìn)行微衛(wèi)星多重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法，其特征是：步驟(4)中多重PCR的反應(yīng)體系為10μL，包括AB?Multiplex?PCR?Master?Mix5μL，混合引物2μL，熒光標(biāo)記接頭0.2μL，去離子水1.8μL，DNA20ng。

10.權(quán)利要求1所述的可用于微衛(wèi)星檢測(cè)的多重?zé)晒釶CR通用接頭在微衛(wèi)星的多重PCR檢測(cè)方面的應(yīng)用。