[發明專利]蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法

有效

• 申請號: 201410341416.X
• 申請日: 2014-07-18
• 公開（公告）號: CN104082148A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 何炎紅;白玉娥;葉冬梅
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 呼和浩特北方科力專利代理有限公司 15100
• 代理人: 徐小明

1.一種蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將帶有側芽的無病蟲害的蝴蝶蘭花梗剪成2～3cm的節段，將芽點外層的苞葉用鑷子等工具剔除，加入4～6ml吐溫20充分攪拌后在自來水下沖洗30min以上，轉移至超凈工作臺內用70%～75%的酒精消毒30s左右，再用無菌水處理2～3次，加入2%NaClO溶液處理5～6min后用無菌水沖洗4～5次，用消毒濾紙吸干表面水分，切去花梗上下兩端與消毒液接觸的表面，接種至初代培養基中培養，繼代培養基為:?1/2MS或/和MS?+2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L瓊脂+350～450mg/L檸檬酸或/和維生素C或/和pvp或/和活性炭+30～40g/L香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰子汁，pH值為5.4～5.9，培養條件為：溫度25±2℃，培養初期的7～10d進行暗培養，以后光照時間為11～13h/d,光照強度2000～3000lux；

??（2）將被切腋芽花梗以初代培養基作為繼代培養基繼代培養，繼代培養基為:?1/2MS或/和MS?+2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L瓊脂+350～450mg/L檸檬酸+30～40g/L香蕉泥，pH值為5.4～5.9；培養條件為：溫度25±2℃，光照時間11～13h/d,光照強度2000～3000lux；

??（3）當叢生芽被誘導長至2cm左右高時，將芽切割分開成單枝，轉移到生根培養基中培養，生根培養基為：1/2MS或/和MS+0.5～1.5mg/L?NAA?+25～30g/L?蔗糖?+6?g/L瓊脂?+1～3g/L?活性炭或/和檸檬酸或/和維生素C或/和pvp?+40g/L香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰子汁；培養條件為：溫度25±2℃，光照時間11～13h/d，光照強度2000～3000lux；

?（4）試管苗煉苗及移栽：當誘導出根系的培養苗長至3～4cm高，有2～3條根，3～4片葉片，葉長度2～3cm時，就可進行煉苗，將培育苗取出培養箱，帶瓶培養苗在苗木培養室自然光下初煉苗放置4～6d，后在培養室自然光下打開培養瓶蓋煉苗2～4d，期間用噴壺噴灑蒸餾水至葉片，保證葉片不失水以增強試管苗對室外環境的適應能力；然后從培養瓶中取出小苗，洗凈根部培養基，對根用0.1%高錳酸鉀浸泡3～5min后取出用濾紙吸干或自然干燥，用滅菌的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上。

2.根據權利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，所述的步驟（1）中的初代培養基為：1/2MS?+5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6?/L瓊脂+400mg/L檸檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5.8。

3.根據權利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，所述的步驟（3）中的生根培養基進一步優化為：1/2MS+1.0mg/L?NAA?+30g/L?蔗糖?+6?g/L瓊脂?+2g/L?活性炭+40g/L香蕉泥，pH值為5.8。

4.根據權利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，所述的步驟（1）的培養條件進一步優化為：溫度25±2℃，光照時間12h/d,光照強度2000～3000lux。

5.根據權利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，所述的步驟（3）中的生根培養條件進一步優化為：溫度25±2℃，光照時間12h/d，光照強度2000～3000lux。

6.根據權利要求2、3、4所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴繁的方法，其特征在于，所述的香蕉泥是把新鮮香蕉用榨汁機打碎。