[發(fā)明專(zhuān)利]一種空心李組培快繁脫毒的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410341375.4
• 申請(qǐng)日: 2014-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104115750A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王高平;許東東;孟彪;馮新建
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 貴州沿河烏江生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 谷慶紅

1.一種空心李組培快繁脫毒的方法，包括如下步驟：

1)植體的選取與預(yù)處理：將沙子空心李植株上的健壯枝條剪下，用生根劑處理后，扦插在經(jīng)過(guò)處理的人工基質(zhì)上，待成活長(zhǎng)出新芽后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室內(nèi)，每日于35-40℃、2000-3000Lux光照條件下培養(yǎng)14-18小時(shí)，然后在常溫、黑暗條件下培養(yǎng)6-10小時(shí)，共培養(yǎng)28-35天；

2)莖尖的剝離：取經(jīng)步驟1)預(yù)處理后的空心李粗壯的莖芽，剝?nèi)ト~片，沖洗干凈后進(jìn)行常規(guī)消毒，然后將莖芽置于40倍解剖鏡下，用無(wú)毒解剖針將葉片和葉原基剝掉，分離出莖芽頂端的分生組織，然后將其快速接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；

3)莖尖的誘導(dǎo)培養(yǎng)：將在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種好的莖尖置于22-28℃、1500-2000Lux的光照條件下每天培養(yǎng)14-18小時(shí)，直至長(zhǎng)成小苗；

4)增殖培養(yǎng)：待小苗長(zhǎng)至1-1.5cm高時(shí)，切下莖尖部分，轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：每日32-38℃、1500-2000Lux光照12-16小時(shí)，常溫培養(yǎng)8-12小時(shí)；苗高2cm時(shí)，剪取小苗葉片進(jìn)行病毒檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)后確認(rèn)無(wú)病毒的小苗，切段轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)至10-20倍數(shù)量；

5)生根培養(yǎng)：將步驟4)增殖形成的小苗分成單株，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，在常溫下進(jìn)行生根培養(yǎng)，長(zhǎng)成生根組培苗；

6)脫毒苗的培養(yǎng)：將已生根的小苗從瓶?jī)?nèi)取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，晾干，然后在中抗病毒藥劑中浸泡一下，用滅菌處理過(guò)的苔蘚包根，栽在魚(yú)苗缽或育苗盤(pán)內(nèi)，置于具有防蟲(chóng)網(wǎng)的溫棚內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，待小苗生長(zhǎng)成正常植株后，剪取枝條扦插，育成生產(chǎn)用的脫毒苗；

7)病毒病菌檢測(cè)：采用草本植物指示檢測(cè)法或電鏡檢測(cè)法對(duì)步驟5)的脫毒苗進(jìn)行檢測(cè)。

2.如權(quán)利要求1所述的空心李組培快繁脫毒的方法，其特征在于：所述步驟1)中的生根劑及處理方法為：取IBA和NAA各25mg/L的水溶液，浸泡空心李健壯枝條下切口部30min，人工基質(zhì)組成為：珍珠巖、蛭石和壤土按照質(zhì)量比3:3:4的比例。

3.如權(quán)利要求1所述的空心李組培快繁脫毒的方法，其特征在于：所述步驟2)中莖芽的長(zhǎng)度為10-20mm，分離莖尖分生組織的長(zhǎng)度為0.5-1.5mm。

4.如權(quán)利要求1所述的空心李組培快繁脫毒的方法，其特征在于：所述步驟2)-3)中誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：硝酸鉀KNO₃：1900mg/L、硝酸銨NH₄NO₃：1650mg/L、磷酸二氫鉀KH₂PO₄：170mg/L、硫酸鎂MgSO₄·7H₂O：370mg/L、氯化鈣CaCl₂·2H₂O：440mg/L、碘化鉀KI：0.83mg/L、硼酸H₃BO₃：6.2mg/L、硫酸錳MnSO₄·4H₂O：22.3mg/L、硫酸鋅ZnSO₄·7H₂O：8.6mg/L、鉬酸鈉Na₂MoO₄·2H₂O：0.25mg/L、硫酸銅CuSO₄·5H₂O：0.025mg/L、氯化鈷CoCl₂·6H₂O：0.025mg/L、乙二胺四乙酸二鈉Na₂·EDTA：37.25mg/L、硫酸亞鐵FeSO₂·7H₂O：27.85mg/L、肌醇：100mg/L、甘氨酸：2mg/L、鹽酸硫胺素VB₁：0.1mg/L、鹽酸吡哆醇VB₆：0.5mg/L、煙酸：0.5mg/L、6-BA：0.5mg/L、NAA：0.2mg/L、三氮唑核苷：60mg/L、蔗糖：30g/L、瓊脂：6g/L；pH值為：5.8。