[發(fā)明專利]一種空心李組培快繁脫毒的方法

有效

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• 申請日: 2014-07-17
• 公開（公告）號: CN104115750A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發(fā)明（設計）人: 王高平;許東東;孟彪;馮新建
• 申請（專利權）人: 貴州沿河烏江生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 谷慶紅

技術領域

本發(fā)明涉及一種空心李組培快繁脫毒的方法，屬于植物組培快繁技術領域和植物細胞工程技術領域。

技術背景

植物病毒病是農業(yè)生產中的主要病害，嚴重的危害農作物的產量和品質，植物病毒病一旦顯示癥狀，要治療十分困難。沙子空心李是貴州省沿河縣沙子鎮(zhèn)的特色水果，栽種的年限很長，栽培的過程中易遭受病蟲的危害，目前繁育的主要方式都是采用無性繁殖嫁接的方法，致使果樹積累了病毒，由于病毒病的危害,嚴重影響其果實產量、品質，使得果實果型不正，口感降低，品質下降，產量降低。我們對沿河縣沙子鎮(zhèn)空心李苗木上采集的冬芽進行電鏡檢測，檢測出了主要危害李子生長的李矮縮病毒(PDV)、李壞死環(huán)斑病毒(PNRSV)，這是國際上公認危害李屬最主要3種病毒中的2種對象。由于病毒對植物危害日益嚴重,世界各國對病毒危害的研究和防治都極為重視,并取得了成功的經驗。因此，要保證沙子空心李這個地理標識特色水果的優(yōu)良品質和產量，很有必要對其進行脫毒的研究工作。

脫毒一般采用莖尖脫毒法、高溫處理脫毒法和化學試劑脫毒法三種方式。

莖尖脫毒法的主要原理是病毒在植株體內的分布不均勻，隨植株部位及年齡而異，其中莖尖部分尤其生長點(0.1-1.0mm區(qū)域)帶病毒最少或不帶病毒，并且越靠近尖端，病毒濃度越低，感染也越低。因為病毒在寄主植物體內隨維管系統(tǒng)篩管轉移，在莖尖分生組織中沒有維管束系統(tǒng)，病毒運動困難，所以，莖尖分生組織不含病毒粒子或病毒濃度很低，病毒在寄主莖尖分生組織中的轉移速度落后于莖尖的生長速度，導致頂端分生組織附近病毒濃度低，甚至不帶病毒，通過莖尖離體培養(yǎng)便可獲得無病毒再生植株。莖尖脫毒的關鍵是莖尖大小和脫毒率，因為脫毒的成功率與所切下莖尖分生組織的大小成反比，為了提高脫毒率必須切下足夠小的莖尖分生組織(0.2-0.5mm)。然而，太小的莖尖分生組織再生成植株很困難。因為再生能力與分生組織的大小成正比。

高溫脫毒法的原理是高溫可抑制病毒的增殖，減緩病毒在植株體內的擴散速度，而高溫對許多植物卻有加速其生長作用。針對不同植物、不同品種和不同植物病毒對溫度的敏感程度不同的特點，對需要脫毒的植株進行一定溫度和時間范圍內的熱力處理，使植物的生長速度明顯超過病毒在植株體內擴散的速度，從而使一部分正在迅速生長的植物組織，如頂芽、嫩稍的尖端不含病毒，把不含有病毒的部分切下接種到適宜的培養(yǎng)基上，最終培養(yǎng)出無毒植株。熱處理脫毒的方法主要有2種：熱水浸泡和高溫空氣處理。對于采用莖尖難以去除病毒的植株，常采用高溫處理和莖尖結合的方法，熱處理結合適宜的莖尖分生組織大小是獲得無病毒植株的關鍵因素。但應用熱處理脫毒也有一定的局限性，主要缺點在于并非所有病毒都對熱處理敏感。

病毒抑制劑處理抗病毒：化學藥劑能夠不同程度地脫除植物病毒，主要是利用抗病毒化學藥劑來抑制病毒核酸與蛋白質的合成或是改變寄主的代謝方式。采用病毒抑制劑與莖尖培養(yǎng)相結合的脫毒方法，可以較容易地脫除多種病毒，而且這種方法對取材要求不嚴。接種莖尖可大于lmm，易于分化出苗，提高存活率。目前用于植物脫毒的抗病毒藥劑主要包括嘌呤和嘧啶類似物、氨基酸、抗生素等，如9-(2-羥二氧)甲基鳥嘌呤、2.硫尿嘧啶、疊氮胸苷、2，4-氧六氫三氮雜苯(DHT)和類似嘌呤堿基代謝物質三氮唑核苷。上述藥劑可在某種程度抑制植物體內或離體葉片內病毒的合成，但尚不能完全抑制病毒使其失活。

以上幾種方法單獨使用都有弊端，有些病毒比較難去除，單獨使用其中某一個方法很難獲得成功，根據我們多年的經驗，采用將熱處理、抗病毒藥劑和莖尖培養(yǎng)相結合三合一脫毒的方法處理，是一種簡便快捷、高效的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于，提供一種空心李組培快繁脫毒的方法。利用該方法對空心李進脫毒處理，通過組培培育出新的無病毒的空心李樹苗，再經過馴化和移栽，從而達到增加產量，改善水果口感的目的。具體技術方案如下：

一種空心李組培快繁脫毒的方法，包括如下步驟：

1)植體的選取與預處理：將沙子空心李植株上的健壯枝條剪下，用生根劑處理后，扦插在經過處理的人工基質上，待成活長出新芽后轉入培養(yǎng)室內，每日于35-40℃、2000-3000Lux光照條件下培養(yǎng)14-18小時，然后在常溫、黑暗條件下培養(yǎng)6-10小時，共培養(yǎng)28-35天；

2)莖尖的剝離：取經步驟1)預處理后的空心李粗壯的莖芽，剝去葉片，沖洗干凈后進行常規(guī)消毒，然后將莖芽置于40倍解剖鏡下，用無毒解剖針將葉片和葉原基剝掉，分離出莖芽頂端的分生組織，然后將其快速接種至誘導培養(yǎng)基中；