[發明專利]抗PDCD4抗體在制備預測紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥敏感性的檢測試劑中的應用

無效

• 申請號: 201410338836.2
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN104155446A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 周春水;張海員;劉佳瑋;傅松濱;白靜;徐暉;孫慧瑩;范芳芳;李亦蘭;劉寶剛;劉通;高民;戴紹春;寧雪蓮;孫悅
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

技術領域

本發明涉及指導紫杉醇藥物應用的參考指標，特別涉及抗腫瘤抑制因子PDCD4的抗體在指導紫杉醇或其衍生藥物個體化用藥中的應用，本發明屬于生物技術領域。

背景技術

紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是一種新型抗腫瘤藥物，它促進細胞微管蛋白的聚合而抑制其解聚，使細胞阻滯在有絲分裂期，進而抑制細胞的增殖(Jordan,MA?et?al,Cancer?Research,1996)。由于其作用于細胞微管系統的獨特抗癌機制，而被應用于乳腺癌、卵巢癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌等的臨床治療。紫杉醇還可增強放療藥物的敏感性，常與放療聯合應用。

肺癌是我國人群中最常見的惡性腫瘤之一，中國也是世界上肺癌最多的國家。根據衛生部2008年公布的全國第三次人口死因調查的數據：肺癌已經成為我國惡性腫瘤死亡的首要原因。肺癌的發病機制復雜，與基因功能改變、吸煙和環境污染有密切關系。目前醫學界按形態特征將肺癌分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌，而非小細胞肺癌發病率占肺癌的85％以上。手術是治療肺癌的首選方法，而化療是治療肺癌的主要方法。絕大部分肺癌需要接受治療性化療或術后輔助性化療。化療對小細胞肺癌的療效無論早期或晚期均較肯定，而對非小細胞肺癌也能達到40％～50％腫瘤緩解率。紫杉醇聯合順鉑是目前治療非小細胞肺癌的最有效方案之一(王麗萍等，藥學與臨床研究，2007)。

但是紫杉醇對不同的惡性腫瘤或同種腫瘤的不同類型的個體治療效果存在差異性。由于目前還缺乏預測和指導紫杉醇個體化用藥的有效參考指標，對病人的用藥缺乏針對性，其療效也很難預測。此外，隨著紫杉醇臨床應用的不斷增加，其耐藥性的出現是限制其臨床應用的重要原因。雖然已知的紫杉醇耐藥機制包括α、βtubulin等的突變以及多耐藥基因(MDR1)的高表達(Januchowski,R,et?al?Biomed?Pharmacotherapy,2013)，但這些因素并不能解釋所有腫瘤細胞對紫杉醇的耐藥性。因此，目前對其耐藥性的機制還是缺乏全面透徹的了解。

本發明應用定量蛋白組學技術對紫杉醇處理后的HeLa細胞中的全蛋白組進行分析并建立了紫杉醇應答蛋白定量數據庫。對該紫杉醇應答蛋白定量數據庫分析發現PDCD4蛋白豐度受紫杉醇的負性調控。PDCD4(Programmed?cell?death?protein4)是一種腫瘤抑制因子(Shibahara?K,et?al,Gene,1995)，PDCD4的低表達常見于肺癌，乳腺癌患者，卵巢癌，結腸癌(Lankat-Buttgereit?B,et?al,Biol?Cell,2009)。PDCD4等位基因位于人染色體10q24，其cDNA全長3.5kb，編碼區約1.4kb。PDCD4蛋白N端含有一個結合RNA的結構域RRM，可與靶點分子的mRNA結合，而C端含有兩個重要的α螺旋結構MA-3M和MA-3C，能夠與真核翻譯起始因子eIF4A結合(Waters?LC,et?al,J?Biol?Chem,2011)。

盡管以前的研究發現PDCD4與eIF4A相結合抑制了蛋白的翻譯，然而近些年的研究表明，PDCD4可能不是一個廣譜的翻譯抑制因子，已有研究顯示PDCD4可特異性結合p53、c-myb、Bcl-xL和XIAP等的mRNA(Liwak?U,et?al,Molecular?and?cellular?biology,2012)，并抑制這些基因的翻譯過程。由于其N端存在能夠特異性結合mRNA的RRM功能域也支持了上述觀點。因此，PDCD4很可能是一個具特異性靶點的翻譯抑制因子，但它的全部特異性抑制靶點尚不清楚。我們應用定量蛋白組學篩選的結果表明，一些調控有絲分裂的蛋白如UBE2S、KIFCI、TPX2等可能是PDCD4的潛在靶點，PDCD4通過抑制這些蛋白的翻譯來影響細胞對紫杉醇的敏感性(結果尚未發表)。

大量新近研究表明PDCD4不僅調控細胞的增殖生長，而且對基因的轉錄、細胞周期控制、DNA損傷應答、氧化應激及腫瘤細胞的藥物敏感性均有重要影響，PDCD4參與的信號通路詳見表1。

表1?PDCD4參與的信號轉導通路

本發明利用定量蛋白組學發現PDCD4是紫杉醇應答蛋白，在此基礎上揭示了PDCD4與紫杉醇敏感性的關系，提出了以PDCD4表達水平指導紫杉醇或其衍生藥物(例如多西他賽)個體化用藥的指導原則。

發明內容