[發(fā)明專利]一種CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410336649.0
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN104127886A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱鈺方;陶翠蓮
• 申請（專利權(quán)）人: 上海理工大學(xué)
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/711;A61K47/04;A61P37/08
• 代理公司: 上海德昭知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)及其制備方法，屬于藥物制劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)

花粉過敏是人們生活中常見的過敏癥狀，嚴(yán)重的還會誘發(fā)氣管炎、支氣管哮喘及肺心病等，若不及時(shí)進(jìn)行治療可能危及生命。目前，全世界的花粉過敏患病率已達(dá)到約5％～10％，我國的病人也在逐年增多。發(fā)病機(jī)理是過敏體質(zhì)的人的鼻粘膜上的肥大細(xì)胞中含有免疫球蛋白IgE(Immunoglobulin?E)，入侵的花粉與IgE抗體結(jié)合，使肥大細(xì)胞脫粒，釋放出過敏介質(zhì)組胺，而組胺使毛細(xì)血管通透性增加，從而引起黏膜水腫、腺體分泌增加及瘙癢等過敏反應(yīng)。

傳統(tǒng)的花粉過敏防治方法主要是避免過敏源和采用抗組胺藥、類固醇激素藥等以控制和緩解過敏癥狀，降低機(jī)體對抗原的敏感性，但這無法從根本上治愈花粉過敏。研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體內(nèi)免疫球蛋白IgG(Immunoglobulin?G)抗體能與IgE抗體競爭肥大細(xì)胞表面受體而封閉IgE抗體，從而抑制IgE抗體與花粉的反應(yīng)，從根本上抑制花粉過敏的發(fā)生。

在抗原提呈細(xì)胞和B細(xì)胞中，CpG寡脫氧核苷酸(Cytosine-phosphorothioate-guanine?Oligodeoxynucleotide)能夠被細(xì)胞內(nèi)涵體膜上的toll樣受體TLR9(Toll-like?receptor9)識別而誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，包括分泌白細(xì)胞介素(Interleukin(IL)-6,IL-12)、I型干擾素(IFN-α/β)等細(xì)胞因子，進(jìn)而促進(jìn)IgG抗體的分泌。因此，有效輸送CpG核酸藥物到抗原提呈細(xì)胞和B細(xì)胞內(nèi)活化TLR9，促進(jìn)機(jī)體內(nèi)IgG抗體的高水平分泌，可以從根本上抑制和治療花粉過敏。但是，跟很多蛋白質(zhì)和DNA一樣，CpG寡脫氧核苷酸本身很容易在細(xì)胞外被DNA酶(DNase)、血清等分解而不能進(jìn)入細(xì)胞活化TLR9。

文獻(xiàn)報(bào)道的CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)主要包括通過病毒攜帶CpG核酸藥物的輸送系統(tǒng)、通過有機(jī)質(zhì)材料攜帶CpG核酸藥物的輸送系統(tǒng)和通過無機(jī)納米顆粒攜帶CpG核酸藥物的輸送系統(tǒng)等。通過病毒攜帶CpG核酸藥物的輸送系統(tǒng)的輸送效率最高，但是會引起免疫原反應(yīng)，且病毒載體自身存在一定的危險(xiǎn)性，價(jià)格也較為昂貴，限制了該輸送系統(tǒng)的使用。有機(jī)質(zhì)材料主要有有機(jī)膠束、脂質(zhì)體、生物降解高分子材料等，但是由于這些材料的熱化學(xué)穩(wěn)定性差而導(dǎo)致釋放不可控，同時(shí)也有免疫反應(yīng)，使得其應(yīng)用也受到很多限制。無機(jī)納米顆粒是目前研究較多的一類CpG核酸藥物載體，例如磷酸鈣、氮化硼、氧化硅、氧化錳等，雖然這些無機(jī)納米顆粒制備可控，毒性較低，可功能化修飾，但其CpG核酸藥物攜帶量小、輸送效率低。

文獻(xiàn)曾報(bào)道了SBA-15介孔氧化硅顆粒用于輸送CpG核酸藥物至293XL-hTLR9細(xì)胞，由于SBA-15介孔顆粒為直徑500納米、長徑比為2的短棒較大尺寸顆粒，細(xì)胞較難攝取介孔顆粒，所以其CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)的輸送效率較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)及其制備方法的方法，以解決上述問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)，其特征在于：包含載體及儲存在載體中的CpG核酸藥物，1mg載體中儲存有50～155μg的CpG核酸藥物，其中，載體為用氨基硅烷偶聯(lián)劑修飾的介孔氧化硅納米顆粒，顆粒粒徑為50nm～100nm，介孔孔徑為2nm～15nm，CpG核酸藥物為CpG寡脫氧核苷酸，含有12～72個(gè)堿基對。

另外，上述CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)還可以具有這樣的特征：氨基硅烷偶聯(lián)劑為γ-氨丙基三甲氧基硅烷、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三甲氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三甲氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三乙氧基硅烷中的任意一種或至少兩種的混合物。

并且，本發(fā)明還提供了一種制備上述CpG核酸藥物輸送系統(tǒng)的方法，其特征在于，包括以下三步：

步驟一：將表面活性劑和助溶劑完全溶解于一定溫度的水中，接著緩慢加入硅源并快速攪拌1～4小時(shí)，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后干燥，干燥后的產(chǎn)物煅燒除去有機(jī)模板，得到介孔氧化硅納米顆粒，各反應(yīng)物的摩爾比為：1～5表面活性劑:10～50硅源:1～10助溶劑:2000～6000水；

步驟二：將介孔氧化硅納米顆粒和氨基硅烷偶聯(lián)劑以1g/0.5ml～1g/2ml的比例加入到無水乙醇中，在隔絕空氣的條件下攪拌24～72h，過濾、洗滌、真空干燥，得到載體；