[發明專利]大薯脫毒組培苗的培養方法

無效

• 申請號: 201410336067.2
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN104041419A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 王曉娟
• 申請（專利權）人: 無錫中農科生物育種技術研究院有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及通過組織培養技術培養植物種苗的方法，具體涉及一種大薯脫毒組培苗的培養方法。

背景技術

大薯為多年生纏繞草質藤本，隸屬于薯蕷科薯蕷屬；原產于亞洲熱帶地區，主要分布在福建、廣東、廣西、海南、臺灣等地。大薯耐旱，耐熱，產量潛力高，且淀粉含量較高，生育期短，營養豐富，色澤鮮艷，口感俱佳，食用、藥用兼備，具有良好的市場開發前景和推廣價值。

目前，大薯主要通過地下塊莖進行無性繁殖，種子材料消耗大，且這種自留種的栽培形式會使其種性退化，品質降低，產量下降。目前，國內外學者開展了對大薯的初步研究，包括化學成分，藥理活性，人工種植等方面。而有關大薯的生物技術方法的研究較少，組織培養的研究主要集中在組織誘導、基本培養條件篩選和理化因子的考查等方面。

目前還沒有找到一個切實有效的培養技術用以解決大薯脫毒苗誘導、增殖生根培養中存在的疑點和難點，從而影響了大薯的深入研究和應用。因此，研究大薯的脫毒培養技術，使得大薯快速繁殖大量的脫毒種苗得以實現，且為大薯的良種繁育及實現產業化顯得十分重要。

發明內容

針對上述現有技術，為克服現有技術中的不足，本發明提供了一種繁殖速度快的大薯脫毒組培苗的培養方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種大薯脫毒組培苗的培養方法，包括如下步驟：

(1)植物外植體的選擇及無菌處理：選擇大薯帶芽莖段為外植體，用水沖洗干凈，切取頂芽，將頂芽組織置于超凈工作臺中，用75％酒精(體積百分數)消毒30～60秒，再用質量濃度為5％～10％次氯酸鈉溶液消毒6～10分鐘，消毒后，取出頂芽，無菌水沖洗3～5次，最后用無菌濾紙吸干無菌水，無菌條件下用解剖鏡剝取莖尖；

(2)叢生芽誘導培養：將上述剝取的莖尖接種到叢生芽誘導培養基中誘導叢生芽，培養期為40天，得叢生芽；所述叢生芽誘導培養基的組份組成為：MS+BA?1.5～2.0mg/L+GA₃0.1～0.5mg/L+NAA?0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂4～6g/L(即：向MS培養基中加入終濃度為1.5～2.0mg/L的BA、0.1～0.5mg/L的GA₃、0.1～0.5mg/L的NAA、20～30g/L的蔗糖以及4～6g/L的瓊脂而成；該表述方式為所屬領域技術人員慣用的表述方式；下同)；

(3)增殖培養：將上述誘導出的叢生芽接種到增殖培養基中進行繼代培養，30天繼代一次，連續轉接4次，培養期為120天；所述增殖培養基的組份組成為：MS+BA?2.0～3.0mg/L+NAA?0.2～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂4～6g/L；

(4)壯苗培養：將上述增殖培養出的叢生芽切成單芽或者小叢芽，接種到壯苗培養基中，培養期為20天；所述壯苗培養基的組份組成為：MS+BA?0.5～1.0mg/L+IBA?0.1～0.6mg/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂4～6g/L；

(5)生根培養：將上述壯苗培養后的開葉的小苗接種到生根培養基中，培養期為35天，即得大薯脫毒組培苗；所述生根培養基的組份組成為：1/2MS+IBA?0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂4～6g/L(1/2MS是指基礎培養基中各物質的濃度為MS培養基的一半)。

優選的，所述步驟(1)中，用水清洗干凈的具體操作方式為：先用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗。

優選的，所述步驟(2)～(5)中，培養的條件為：培養溫度23～27℃，光照時間10～16小時/天，光照強度2000～3000lx。

優選的，所述步驟(2)中，叢生芽誘導培養基的組份組成優選為：MS+BA?2.0mg/L+GA₃0.1mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH值為5.5～5.8(各組分混合混勻后，若pH不在此范圍內，則通過氫氧化鈉溶液或鹽酸調整pH至該范圍內；下同)。

優選的，所述步驟(3)中，增殖培養基的組份組成優選為：MS+BA?2.5mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH值為5.5～5.8。

優選的，所述步驟(4)中，壯苗培養基的組份組成優選為：MS+BA?0.5mg/L+IBA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH值為5.5～5.8。

優選的，所述步驟(5)中，生根培養基的組份組成優選為：1/2MS+IBA?0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH值為5.5～5.8。