[發(fā)明專利]一種深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)安絡小皮傘胞外多糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410335964.1
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN104073531A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設計）人: 王文風;徐國華;徐玲;王英燕;張芙蓉;楊亞威;高巖
• 申請（專利權）人: 江蘇神華藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術領域

本發(fā)明屬于微生物技術領域，具體涉及一種深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)安絡小皮傘胞外多糖的方法。

背景技術

安絡小皮傘，學名為Marasmius?androsaceus(L.ex?Fr.)Fr.別名鬼毛針、茶褐小皮傘等，屬于擔子菌綱、傘菌目(Agaricales)、白蘑科(ThichoLomataceae)、小皮傘屬(Marasmius)。生于深山密林、陰冷潮濕、酸性土壤上面的枯枝上，主要分布于我國吉林、湖南、湖北、廣東等省。我國民間早有用野生安絡小皮傘的根狀菌索來治療骨折疼痛、跌打損傷等。據(jù)廣東微生物研究所(1975)報道，該所與廣州第一制藥廠等用人工發(fā)酵培養(yǎng)方法，獲得安絡小皮傘發(fā)酵培養(yǎng)物，再將其濃縮制成的“安絡痛膠囊”和藥酒，經(jīng)臨床驗證600例，證明對三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、偏頭痛、眶上神經(jīng)痛、面部神經(jīng)麻痹、面肌痙攣及風濕性關節(jié)炎等均有一定的療效。對中、輕麻瘋神經(jīng)痛、腰肌勞損等也有一定緩解作用，是對人體安全、無毒副作用的鎮(zhèn)痛和抗風濕藥物。目前用其制成的藥品，除“安絡痛膠囊”外，還有“安絡痛酊”、“安絡痛注射液”和“安絡解痛片”等。臨床和市場效果很好。近年來的研究表明安絡小皮傘的營養(yǎng)保健價值也很高，能促進神經(jīng)組織和纖維結締組織的炎癥消失，改善局部的血流循環(huán)和組織營養(yǎng)狀況，恢復神經(jīng)功能。菌內(nèi)含有的氨基酸、糖類等成分可以作為食品和保健品的添加成分，對人體的免疫力提高和抗衰老有一定的作用。安絡小皮傘其它組分的功能還處于正在研究的階段。

近年來越來越多的學者開始研究安絡小皮傘的藥效成分和藥理作用,但是目前國內(nèi)野生的安絡小皮傘資源稀少，子實體的人工栽培成功率低且重復性差，固體栽培周期長、污染率高，易受周圍環(huán)境限制，無法滿足日益增長的市場需求。而深層液態(tài)發(fā)酵技術具有發(fā)酵周期短、高產(chǎn)量、污染率低等優(yōu)點、不受周圍環(huán)境限制，資源設備利用率高等優(yōu)點，因而受到越來越多的研究者們的青睞。國內(nèi)外也有少量大專院校的研究者對安絡小皮傘的深層發(fā)酵進行過研究，但往往其主要側重點是如何獲取更高的生物量，只有少部分研究者關注安絡小皮傘的功效成分多糖的研究，但主要是通過菌絲體提取獲取多糖，作為發(fā)酵的副產(chǎn)物發(fā)酵濾液大都作為廢液直接排掉，浪費了大量的寶貴資源，并且增加了環(huán)保壓力，提升了排污成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)安絡小皮傘多糖的技術瓶頸，采用液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)安絡小皮傘多糖克服了固態(tài)發(fā)酵周期長、投資大、受季節(jié)限制、難以產(chǎn)業(yè)化等弊端，采用此發(fā)明能夠連續(xù)、自動化、產(chǎn)業(yè)化的生產(chǎn)出高品質的安絡小皮傘多糖。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明主要按照下述步驟進行：

本發(fā)明的產(chǎn)業(yè)化深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)安絡小皮傘胞外多糖的方法包括下述步驟：

一種制備安絡小皮傘發(fā)酵液的方法，將安絡小皮傘種子培養(yǎng)液接入滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為10～20％，通風比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下發(fā)酵培養(yǎng)4‐6天，得到安絡小皮傘發(fā)酵液；其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1-3％、淀粉1-3％、酵母粉0.2-1％、玉米漿0.5-2％、磷酸二氫鉀0.1-0.5％、七水硫酸鎂0.1-0.5％、消泡劑0.01-0.05％、20000u/ml的耐高溫α-淀粉酶0.001-0.007％(v/v)，調(diào)節(jié)pH值6.5-7.5。上述培養(yǎng)基組成中除淀粉酶以外的“％”，均表示g/100ml。

所述的消泡劑可以為植物油(豆油、菜籽油)類、有機醚類等物質。

其中，所述的安絡小皮傘種子培養(yǎng)液優(yōu)選通過以下方法制備得到：

1)一級種子培養(yǎng)：將經(jīng)活化搖瓶菌種接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基，接種量為0.1～2％，通風比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培養(yǎng)5～6天，得到安絡小皮傘一級種子培養(yǎng)液；

2)二級種子培養(yǎng)：將步驟1)所得的一級種子培養(yǎng)液接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基，接種量為10～20％，通風比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培養(yǎng)3～4天，得到所述的安絡小皮傘種子培養(yǎng)液。

所述的液體種子培養(yǎng)基配方優(yōu)選為：葡萄糖2-4％、蠶蛹粉0.1-0.5％、黃豆餅粉1-3％、磷酸二氫鉀0.1-0.5％、七水硫酸鎂0.1-0.5％、消泡劑0.01-0.05％，調(diào)節(jié)pH值6.5-7.5。上述培養(yǎng)基組成中的“％”均表示g/100ml。

所述的發(fā)酵培養(yǎng)終點為：菌球變碎、濾液渾濁；還原糖降至最低并略有波動，還原糖控制0.3％(g/100g)以下；鏡檢菌絲細碎，無雜菌污染。