[發(fā)明專利]一種深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)安絡(luò)小皮傘胞外多糖的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410335964.1
• 申請(qǐng)日: 2014-07-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104073531A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王文風(fēng);徐國(guó)華;徐玲;王英燕;張芙蓉;楊亞威;高巖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇神華藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04;C08B37/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

1.一種制備安絡(luò)小皮傘發(fā)酵液的方法，其特征在于將安絡(luò)小皮傘種子培養(yǎng)液接入滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為10～20％(v/v)，通風(fēng)比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下發(fā)酵培養(yǎng)3～5天，得到安絡(luò)小皮傘發(fā)酵液；其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1-3％、淀粉1-3％、酵母粉0.2-1％、玉米漿0.5-2％、磷酸二氫鉀0.1-0.5％、七水硫酸鎂0.1-0.5％、消泡劑0.01-0.05％、20000u/ml的耐高溫α-淀粉酶0.001-0.007％(v/v)，調(diào)節(jié)pH值6.5-7.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備安絡(luò)小皮傘發(fā)酵液的方法，其特征在于所述的安絡(luò)小皮傘種子培養(yǎng)液通過(guò)以下方法制備得到：

1)一級(jí)種子培養(yǎng)：將經(jīng)活化搖瓶菌種接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基，接種量為0.1～2％(v/v)，通風(fēng)比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培養(yǎng)5～6天，得到安絡(luò)小皮傘一級(jí)種子培養(yǎng)液；

2)二級(jí)種子培養(yǎng)：將步驟1)所得的一級(jí)種子培養(yǎng)液接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基，接種量為10～20％(v/v)，通風(fēng)比為1：0.5‐1.5vvm，罐壓0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培養(yǎng)3～4天，得到所述的安絡(luò)小皮傘種子培養(yǎng)液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備安絡(luò)小皮傘發(fā)酵液方法，其特征在于所述的液體種子培養(yǎng)基配方為：葡萄糖2-4％、蠶蛹粉0.1-0.5％、黃豆餅粉1-3％、磷酸二氫鉀0.1-0.5％、七水硫酸鎂0.1-0.5％、消泡劑0.01-0.05％，調(diào)節(jié)pH值6.5-7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備安絡(luò)小皮傘發(fā)酵液方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)終點(diǎn)為：菌球變碎、濾液渾濁；還原糖降至最低并略有波動(dòng)，還原糖控制0.3％以下；鏡檢菌絲細(xì)碎，無(wú)雜菌污染。

5.一種安絡(luò)小皮傘胞外多糖提取的方法，其特征在于該方法包括下述步驟：

1)分離：將權(quán)利要求1所得的安絡(luò)小皮傘發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)分離，得到安絡(luò)小皮傘上清液；

2)濃縮：將步驟1)所得的濾液進(jìn)行采用二級(jí)低溫濃縮，得到濃縮比重為1.25～1.40的濃縮漿；

3)醇沉、烘干：加入濃縮漿重量3-5倍量的95％酒精，用酒精計(jì)檢測(cè)混合液酒精度約65-80％(v/v)，靜置8-16h，將沉淀物進(jìn)行真空烘干，溫度50‐75℃，真空度不低于0.085MPa；烘干至干燥物水分含量為3～8％(g/100g)，即得胞外糖。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的安絡(luò)小皮傘胞外糖的方法，其特征在于所述步驟1)中所述的分離采用臥螺離心機(jī)進(jìn)行，轉(zhuǎn)速控制在2500‐3500r/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的安絡(luò)小皮傘胞外糖的方法，其特征在于所述步驟2)中所采用的二級(jí)濃縮為：一級(jí)采用雙效蒸發(fā)器濃縮，將發(fā)酵液濃縮到比重為1.15‐1.20，二級(jí)采用單效濃縮器濃縮，即將比重為1.1‐1.20的濃縮液繼續(xù)濃縮到比重為1.25～1.40的濃縮漿；濃縮過(guò)程均要求控制溫度不高于75℃，真空度不低于0.085MPa。