[發明專利]一種懸浮培養BHK-21細胞的無血清無動物源培養基及其配制方法

有效

• 申請號: 201410335070.2
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN105018416B
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 趙峻嶺
• 申請（專利權）人: 內蒙古金源康生物工程有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京中海智圣知識產權代理有限公司 11282
• 代理人: 李大為

本發明公開了一種懸浮培養BHK?21細胞的無血清無動物源培養基及其配制方法，發明通過對培養基中氨基酸、無機鹽、維生素、脂類、水解物和其余添加物的添加和組分優化，顯著促進了細胞的增殖速度，縮短了倍增時間，使細胞達到更高生長密度的同時保持較高的活力。該培養基是適合BHK?21細胞高密度懸浮培養的低成本無血清無動物源低蛋白培養基，通過脂類、維生素、微量元素、重組蛋白和水解物等成分的添加完全替代血清的生物學功能，避免了血清對后期純化和抗原的分離帶來的一些負面作用。通過對培養基組分的優化，使得BHK?21細胞在懸浮培養中增殖速度更快，細胞密度更高，細胞活力更強，更適合于規?；I生產。

技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，具體涉及一種懸浮培養BHK-21細胞的無血清無動物源培養基及其配制方法。

背景技術

BHK-21細胞系即敘利亞倉鼠腎細胞，英文名稱:Baby Hamster Kidney Cell，1961年英國人I.A.Macpherson和M.G.P Stocker用1日齡敘利亞倉鼠的腎建立的傳代細胞，常用的是克隆13，是由5只一日齡，性別特征不是特別明顯的腎細胞而來，即：BHK-21C13，中文全名為：敘利亞倉鼠腎細胞克隆13，以下簡稱BHK-21細胞。BHK-21細胞是世界衛生組織和中國生物制品規程認可的生產疫苗的細胞系，可以用于多種病毒的增殖和純化，如口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)，腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)，呼腸孤病毒(Reovirus)，水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)等。由于它生長速度較快、病毒敏感譜廣、對大量制備病毒疫苗有利，研究人員經無數次傳代馴化，使它可懸浮生長并用于病毒性疫苗的生產，如口蹄疫疫苗，狂犬病疫苗，乙腦疫苗等。

目前采用BHK-21細胞的疫苗生產中，無血清懸浮培養是最為先進的工藝。無血清培養基相比有血清培養基具有諸多優勢：1)可克服血清批次間的差異性，使細胞培養性能更加穩定，能提高結果的重復性；2)可避免血清的外源性污染，因為動物來源血清常攜帶病毒或支原體；3)可簡化下游目的產物的分離純化，節省成本；4)成分相對明確，有利于研究細胞生長、增殖、分化、代謝及基因調控等一系列細胞行為。

目前，國外的無血清培養基產品價格高且配方保密，同時國內外均缺少專門針對BHK細胞培養的無血清培養基，而且培養基性能較差，例如中國內2014年公布的最新專利CN103555658A，其發明的BHK-21無血清懸浮培養基，以50*10⁴cells/ml接種，24小時后僅能達到150*10⁴cells/ml，細胞增殖速度緩慢，倍增時間較長，96小時后僅能達到500*10⁴cells/ml，所能支持細胞生長的密度較低。中國內的培養基龍頭企業北京清大天一生物技術有限公司開發出可以懸浮培養BHK細胞的低血清培養基，根據其細胞手冊2011版顯示，即使清大天一生物技術有限公司的低血清培養基，懸浮培養BHK-21細胞的密度也僅僅達到了400*10⁴cells/ml。綜上所述，開發低成本、支持細胞快速增殖和高密度懸浮培養的BHK-21細胞無血清培養基對國內動物疫苗行業的發展具有重要意義。

發明內容

本發明目的在于，克服現有技術中的缺陷，提供一種針對中國工業生產所用BHK-21細胞的生長的特點，研制適合BHK-21細胞高密度懸浮培養的低成本無血清無動物源低蛋白培養基。通過添加脂類、維生素、微量元素、重組蛋白和水解物等組分來替代血清的生物學功能，避免了血清對后期純化和抗原的分離帶來的一些負面作用。通過對培養基組分的優化，使BHK-21細胞在懸浮培養中增殖速度更快，細胞密度更高，細胞活力更強，更適合于規?；I生產。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案是：提供一種促進懸浮培養BHK-21細胞快速增殖的無血清無動物源培養基，其特征在于：包括氨基酸，無機鹽，維生素，蛋白水解物，脂類和添加物；