[發明專利]一種E2F3基因沉默對前列腺癌動物模型中全血E2F3影響的方法

無效

• 申請號: 201410334972.4
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN104131088A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 胡海龍;孫巖;陳濤;謝林國
• 申請（專利權）人: 天津市泌尿外科研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/864;G01N33/68;A61K49/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于E2F3基因技術領域，尤其涉及一種E2F3基因沉默對前列腺癌動物模型中全血E2F3影響的方法。

背景技術

前列腺癌是歐美最常見的男性惡性腫瘤之一，目前在美國前列腺癌的發病率已經超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤，在我國，隨著生活方式的改變、人口的老齡化及診斷技術的提高，前列腺癌的發病率也呈持續增長趨勢，在北京及上海等現代化程度較高的城市，前列腺癌已經超過膀胱癌，成為最為常見的泌尿系統腫瘤。

腫瘤的發生、發展與細胞周期調節失控密切相關，細胞周期調控發生異常，使受損害的DNA得不到及時修復，細胞繼續分裂，因遺傳不穩定，可轉變為癌細胞，E2F3是E2F轉錄因子家族成員之一，也是細胞周期調控過程中起重要作用的調控蛋白之一，其是細胞由Gl期進入S期最重要的細胞因子，調控著細胞增殖，E2F3聯系著Cyclins、CDKs、Rb及細胞增殖等相關基因，這些基因在細胞周期不同階段起作用，并且隨著細胞的轉變而發生變化，Maddiso等的研究表明，Rb的失活引起E2F表達增多，可引起早期前列腺癌，促進前列腺癌的發展進程和轉移，Foste等應用免疫組化的方法研究發現前列腺癌組織中E2F3的表達率達到67％，而在良性前列腺組織中僅有2.3％細胞核表達E2F3，在正常人前列腺標本中無E2F3的表達，上述的研究結果表明，E2F3在前列腺癌的發病機制中處于非常重要的地位，而有效的沉默E2F3基因的表達為系統的研究E2F3與前列腺癌的關系奠定基礎。

隨著RNAi技術的出現，基因沉默技術在保持高效的基礎上更為特異的沉默靶mRNA，從而使相應蛋白表達下降，因為RNAi技術通過抑制宿主細胞mRNA轉錄后的基因表達而發揮作用，利用RNAi技術進行抗腫瘤基因治療有望成為癌癥治療的新的突破口，當前RNAi技術在疾病診治中應用的困難主要集中在兩方面，即靶目標的有效性以及siRNAs或shRNAs靶點轉運的高效性，其一，靶目標的有效性是進行RNAi應用研究的重要前提，在設計siRNAs或shRNAs時，必須高度重視其靶向有效性的基礎研究；尤其是當進入臨床試驗時，更應當注意其設計的有效性，以避免產生體內的非特異性反應或者更為嚴重的目前還尚未明了的潛在不良反應，其二，siRNAs或shRNAs靶點轉運的高效性包括分子體內穩定性和穿透細胞膜所涉及到的轉運問題，早期的RNAi多應用脂質體進行質粒載體或siRNA直接向細胞內轉染，這種情況常常因為轉染效率的低下而導致基因沉默效果不佳，AAV干擾載體的出現為更加高效的進行基因沉默奠定了基礎。

AAV載體具有逆轉錄病毒和腺病毒的許多優點，并且與其它幾種病毒相比，腺相關病毒載體具有安全性好、無致病性、免疫原性低、物理性質穩定、感染細胞譜廣，可介導外源基因長期穩定表達等優點，被視為最有前途的基因治療載體之一，成為目前基因治療載體研究的熱點，由于AAV載體的容量較大，在表達干擾序列的同時，還能夠同時表達眾多的蛋白，這為多靶點進行前列腺癌基因治療提供便利，由于AAV病毒在人體具有良好的組織相容性，其已成為腫瘤基因治療的高效載體而受到重視，既往的研究表明AAV載體能夠高效的轉染前列腺癌細胞系，但其在體內試驗中AAV病毒載體是否能夠有效的進行RNAi干擾序列的表達，是否能夠有效的降低靶mRNA的表達，這就需要建立前列腺癌動物模型而得到驗證。