[發(fā)明專利]豬帶絳蟲重組雙歧桿菌疫苗穩(wěn)定性的研究方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410334944.2 | 申請日： | 2014-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN104099364A | 公開（公告）日： | 2014-10-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 周必英 | 申請（專利權(quán)）人： | 遵義醫(yī)學院 |
| 主分類號： | C12N15/74 | 分類號： | C12N15/74;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所 52100 | 代理人： | 吳無懼 |
| 地址： | 563003 *** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 絳蟲 重組 桿菌 疫苗 穩(wěn)定性 研究 方法 | ||
1.豬帶絳蟲重組雙歧桿菌疫苗穩(wěn)定性的研究方法，其特征在于：包括以下步驟：
（1）重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化長雙歧桿菌：分別將豬帶絳蟲重組質(zhì)粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18與B.longum感受態(tài)細菌混勻，冰浴后轉(zhuǎn)移至電擊杯中，電擊完畢后立即將混合液轉(zhuǎn)入到MRS液體培養(yǎng)基的EP管中厭氧培養(yǎng)；將菌液涂布于含氨芐青霉素的MRS瓊脂平板上，厭氧培養(yǎng)；?
（2）陽性菌株的PCR鑒定：挑取上述平板中單個菌落至含氨芐青霉素的MRS液體培養(yǎng)基的EP管中，厭氧培養(yǎng)；將菌液離心，棄上清，沉淀中加入蔗糖溶液重溶菌體沉淀，溫浴；抽提質(zhì)粒為模板，進行PCR鑒定；
（3）陽性菌株傳代培養(yǎng)的穩(wěn)定性或陽性菌株不同保存條件的穩(wěn)定性：取上述鑒定的陽性菌株在MRS培養(yǎng)基中傳代，每次傳代抽提質(zhì)粒為模板，進行PCR鑒定；或?qū)⑸鲜鲨b定的陽性菌株分別放置不同溫度不同時間后，取出保存的菌液，抽提質(zhì)粒，進行電泳鑒定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豬帶絳蟲重組雙歧桿菌疫苗穩(wěn)定性的研究方法，其特征在于：所述的電擊參數(shù)設置為：電壓1.25KV、場強12.5?KV/cm、電容25μF、電阻200Ω、轉(zhuǎn)化時間5ms。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豬帶絳蟲重組雙歧桿菌疫苗穩(wěn)定性的研究方法，其特征在于:?pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18分別能在宿主菌B.longum中穩(wěn)定遺傳7代、6代和9代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豬帶絳蟲重組雙歧桿菌疫苗穩(wěn)定性的研究方法，其特征在于:陽性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum在-20℃、-80℃、液氮中保存穩(wěn)定，保存期限2個月。
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