[發明專利]一種酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法有效
| 申請號： | 201410334141.7 | 申請日： | 2014-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN104082146A | 公開（公告）日： | 2014-10-08 |
| 發明（設計）人： | 李穎岳;王巖;龐曉明;王歡;康亞璇 | 申請（專利權）人： | 北京林業大學 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00;C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京市廣友專利事務所有限責任公司 11237 | 代理人： | 張仲波 |
| 地址： | 100083 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酸棗 不定 途徑 誘導 多倍體 方法 | ||
1.一種酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
啟動培養，剪取酸棗無菌苗的幼嫩葉片，刻傷后接種到不定芽啟動培養基一上進行9～11d預(暗)培養；
誘導培養，將葉片轉至含有40～80mg/L秋水仙堿的液體培養基中進行多倍體誘導培養，在黑暗條件下100rmp搖床震蕩培養2～3d后轉入不定芽啟動培養基一上繼續暗培養8～10d；
伸長培養，預(暗)培養結束后，將葉片轉接到不定芽伸長培養基二上，移至光下培養25～35d；
壯苗培育，將葉片再生出的不定芽從葉片上剝離，轉接到含有植物生長調節劑的MS壯苗培養基中，培養18～20d；
幼葉檢測，待不定芽生長健壯后，取幼嫩葉片，進行多倍體檢測。
2.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述不定芽啟動培養基一包括改良WPM基本培養基和包含1.0mg/L的噻苯隆和0.3mg/L的吲哚-3-丁酸的植物生長調節劑；
所述不定芽伸長培養基二包括改良WPM基本培養基和包含0.1mg/L的吲哚-3-乙酸和0.5mg/L的赤霉素的植物生長調節劑。
3.根據權利要求2所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述改良WPM基本培養基含蔗糖30g/L，ph＝5.8～6.2，配方為：
4.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述MS壯苗培養基含蔗糖30g/L，ph＝5.8-6.2，配方為：
5.根據權利要求4所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述MS壯苗培養基中的植物生長調節劑為1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.4mg/L的吲哚丁酸。
6.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述幼嫩葉片為酸棗無菌苗植株形態學上端至下端的第3-5枚的三枚葉片；所述葉片刻傷方法為沿中脈垂直方向橫切2～3個傷口，切斷主脈但不切斷葉片；所述接種方式為近軸端接觸培養基。
7.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述誘導培養所用液體培養基為不加入瓊脂的不定芽啟動培養基一，所述秋水仙堿的濃度為40～80mg/L。
8.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述伸長培養階段采用人工控制的培養條件，所述人工控制的培養條件中光照強度為19000x～21002x，光照時間12～16h/d，溫度23～27℃。
9.根據權利要求1所述的酸棗不定芽途徑誘導多倍體的方法，其特征在于，所述多倍體檢測方法為流式細胞儀法，所用裂解液為改良WPB裂解液，所用染液為10ug/L的DAPI染液；
其中，所述改良WPB裂解液ph＝7.2～7.8，配方為：
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