[發明專利]無標記電化學發光腫瘤標志物免疫傳感器的制備和應用

有效

• 申請號: 201410332908.2
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN104155445A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 張勇;李建修;魏琴;馬洪敏;杜斌
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種無標記電化學發光腫瘤標志物免疫傳感器的制備和應用。具體是采用無標記的電化學發光方法，基于磷酸鈷銨片狀材料（NH₄CoPO₄）和金@銀核殼納米棒?–?魯米諾?–?殼聚糖復合材料（Au@AgNRs–Lum–Chi）構建的快速、靈敏檢測腫瘤標志物的免疫傳感器，屬于新型納米功能材料與生物傳感器技術領域。

背景技術

腫瘤的早期診斷、早期治療是提高癌癥患者生存率的關鍵。腫瘤標志物的檢測可反映腫瘤的生物學特性，對治療、輔助診斷、判斷預后均有重要意義。目前已有的腫瘤標志物的臨床檢測方法很多，如酶免疫法、放射免疫法等，但這些檢測方法存在諸多不足，如酶免疫法中酶容易失活、放射免疫法中放射性污染嚴重等。因此，發明一種靈敏度高、特異性強、工作條件要求不高的環境友好型腫瘤標志物傳感器迫在眉睫。

電化學發光免疫傳感器由于其靈敏度高、特異性好、操作簡便等優點被廣泛應用于臨床診斷、藥物分析等領域，如腫瘤標志物傳感器等。制備性能優越的電化學發光免疫傳感器，其最關鍵技術就是發光強度及穩定性和免疫分子的有效固定及重現性等性能的提高。

魯米諾–過氧化氫（Lum-H₂O₂）發光體系由于成本低廉、發光強度高，已被廣泛應用到電致化學發光的分析方法中，但由于Lum-H₂O₂發光體系的發光需要借助一定的催化劑，才能有快速、靈敏、高強度的光信號響應，因此一般常加入辣根過氧化物酶（HRP）來進行催化反應。而HRP的使用對反應條件要求苛刻，不利于Lum-H₂O₂發光體系的普及使用。棒狀的金@銀核殼納米棒（Au@AgNRs）由于具有催化Lum-H₂O₂發光體系的作用，因此可以作為模擬酶被用來代替HRP，同時由于其為無機納米材料，相比于HRP具有較寬泛的使用條件。另外，Au@AgNRs具有比表面積大、易于與多種生物分子（核酸、蛋白質和生物分子等）結合、對人體無害等特點，可被應用于電致化學發光免疫傳感器的制備中。

NH₄CoPO₄是一種片狀的微納米材料，已被應用于超級傳感器的研究中，由于其片狀結構，具有很好的充放電特性，應用到本發明中，可以達到穩定Lum-H₂O₂發光體系，并增大電極比表面積的作用。

本發明先后使用NH₄CoPO₄和Au@AgNRs-Lum-Chi對電極進行修飾，然后利用腫瘤標志物抗體以及與其特異性結合的抗原的相繼加入，使得發光強度降低，從而實現了采用無標記的電化學發光方法檢測腫瘤標志物的免疫傳感器的構建。本發明利用NH₄CoPO₄對Lum-H₂O₂發光體系的穩定作用和Au@AgNRs對lum-H₂O₂發光體系的催化作用，設計了一種簡單、快速、特異性好和靈敏度高的無標記的電化學發光免疫傳感器，并應用于腫瘤標志物的檢測。

發明內容

本發明的目的之一在于避免現有檢測方法中存在的儀器設備復雜、操作過程繁瑣及對檢驗人員的技能要求高等缺點，提供一種無標記電化學發光腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器具有靈敏度高、特異性強的特點，且制備簡單、操作方便，可用于腫瘤標志物的快速、靈敏檢測；

本發明的目的之二在于將所制備的無標記電化學發光腫瘤標志物免疫傳感器使用新型功能材料作為模擬酶，替代了生物酶，避免了實際樣品檢測時生物酶失活及檢測環境的影響。

本發明采用的技術方案如下：

1.?本發明所述的一種無標記電化學發光腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為：

（1）金?@?銀核殼納米棒?–?魯米諾?–?殼聚糖復合材料（Au@AgNRs-Lum-Chi）的制備