[發明專利]一種快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法

有效

• 申請號: 201410332529.3
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN104152549A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 熊家軍;楊利國;蘇皖中;劉青;劉孝然;張華林;張祖翔;楊菲菲;潘斌
• 申請（專利權）人: 華中農業大學;湖北勁牛牧業有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

技術領域

本發明涉及一種快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法。

背景技術

亞洲水牛包括河流型(River?Buffalo)和沼澤型(Swamp?Buffalo)兩個亞種。河流型水牛主要產于南亞地區，例如尼里-拉菲水牛(巴基斯坦)和摩拉水牛(印度)，沼澤型水牛則以我國為最。水牛具有較強的抗病力和耐粗飼的特點，適應濕熱氣候，非常適合我國南方地區飼養，南方地區鮮奶消費的缺口也可以由水牛奶填補。水牛奶因口感獨特，奶香味濃郁，其脂肪、蛋白質和鈣、磷的含量比普通牛奶高而備受到人們的青睞，從而激起了奶水牛業的興起和快速發展。這些年來，在國家產業政策刺激下，水牛奶業日益受到重視，在不久的將來，奶水牛行業必將成為南方奶業的重要支柱。但是水牛屬于單胎動物，繁殖力低，與黃牛相比，水牛具有發情期晚、發情不明顯、受胎率低及產后發情間隔時間長等特點，整體繁殖力低(王根林，2006)。水牛產奶量與荷斯坦牛相比，僅為其一半，沼澤型水牛的產奶量更低。在現代化養殖的條件下，僅靠自然繁殖是遠遠不能滿足需要的，因此一般都會引進河流型水牛進行雜交以提高水牛的繁殖性能和產奶量。河流型水牛染色體數目是50(Dutt?MK，Bhattacharya?P.Chromosomes?of?the?Indian?water?Buffalo.Nature，1952，27:1129-1129)，而沼澤型水牛為48(Berardino?DD，Iannuzzi?L.Chromosome?banding?homologies?in?Swamp?and?Murrah?Buffalo.The?Journal?of?Heredity，1981，72:183-188)。導致兩者染色體數目不同的原因是，沼澤型水牛最大的1號染色體，基因和形態上與河流型水牛4和9號染色體極為相似，相當于河流型水牛第4號染色體短臂的端粒和9號染色體的著絲粒串聯融合，形成一條染色體(Berardino?DD，Iannuzzi?L.Chromosome?banding?homologies?in?Swamp?and?Murrah?Buffalo.The?Journal?of?Heredity，1981，72:183-188)。兩個亞種之間會雜交產生染色體為49的后代，這些后代之間是可育的，相互雜交會產生48、49和50三種不同染色體數的后代。根據有關的研究表明，雜交水牛的繁殖性能比純種有所降低，主要體現在其核型數2n＝49的雜交水牛會產生異常配子，導致胚胎發育的不正常，最終導致胚胎在早期便死亡，宏觀上表現為情期配種受胎率和年受胎率分別降低12.3％和6.4％，產仔間隔長達97.6天(黃右軍，尚江華，梁夢玫，張秀芳，黃芬香.河流型水牛與沼澤型水牛雜交后代(2n＝49)染色體遺傳與繁殖力的研究.遺傳，2003，25(2)：155-159)。若通過核型水平對水牛進行選擇，那么對雜交水牛群的整體繁殖能力將有顯著的提升，辨別雜交水牛核型數也顯得非常重要。

傳統鑒定核型的方法是采用取外周血淋巴細胞培養一段時間后，加入秋水仙素使細胞分裂停留在中期，再低滲固定，制作滴片，通過染色體照片的對比分析對染色體數目進行分組，觀測和描述組內各染色體形態和特征，進而確定其染色體組型并闡明生物的染色體組成。但是該方法較為繁瑣，周期長，費時費力，成本也不低，檢測大群體雜交水牛便非常麻煩，不符合現代化大規模養殖的發展方向。然而快速檢測雜交水牛核型的方法依舊沒有相關文獻證明已經正在研究或者研究出來，甚至連這方面的探索也沒有文獻資料可供查詢。哺乳動物中，亞種間由于長時間的地理和生殖隔離，相同的基因也會有不同的突變和演化。在水牛的亞種雜交中，不同核型的雜交水牛在特定染色體上的基因會有所區別，這些區別會體現在堿基序列上。因此本研究依據分子標記的應用和雜交水牛核型分析，將二者聯系起來，建立利用分子標記快速檢測雜交水牛核型的方法，該方法尚無相關文獻發表或說明，屬于創新型研究，可快速方便大規模檢測雜交水牛的核型，改良群體結構，從而提高繁殖和泌乳性能，加快雜交水牛的品種改良速度。