[發明專利]一種快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法有效
| 申請號： | 201410332529.3 | 申請日： | 2014-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN104152549A | 公開（公告）日： | 2014-11-19 |
| 發明（設計）人： | 熊家軍;楊利國;蘇皖中;劉青;劉孝然;張華林;張祖翔;楊菲菲;潘斌 | 申請（專利權）人： | 華中農業大學;湖北勁牛牧業有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武漢開元知識產權代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐紹新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 鑒別 雜交 水牛 染色體 核型 方法 | ||
1.一種快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法，其特征在于包括以下步驟：
1)提取雜交水牛的總DNA；
2)根據水牛RBP3基因的兩個突變位點的核苷酸序列，設計兩組引物對——RBP3-1引物對和RBP3-2引物對，其中：
RBP3-1的正向引物為5’-GTGCCGCTGCTACTCTCTTACT-3’，
RBP3-1的反向引物為5’-TCCTTACCTATGTGACGCTTGACG-3’；
RBP3-2的正向引物為5’-AACACCTATCCACGACCTTTATCAT-3’，
RBP3-2的反向引物為5’-AGTTGCTTTAGCGAAGACACTATTATC-3’；
3)分別用步驟2)中的兩組引物對雜交水牛的DNA進行PCR擴增，得到兩種擴增產物；
4)分別對步驟3)所得到的兩種擴增產物進行酶切、分型：RBP3-1引物對的擴增產物選用Ecil內切酶，酶切條帶中出現2條帶確認為2N＝50核型；RBP3-2引物對的擴增產物選用Drdl內切酶，酶切條帶中出現1條帶確認為2N＝48核型，酶切條帶中出現3條帶確認為2N＝49核型。
2.如權利要求1所述的快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法，其特征在于：步驟3)中的PCR擴增體系為：雙蒸水8μL、Mix10μL、正向引物0.5μL、反向引物0.5μL、雜交水牛DNA1μL。
3.如權利要求1或2所述的快速鑒別雜交水牛染色體核型的方法，其特征在于：步驟4)中所述的酶切，是將兩種擴增產物5μL分別與雙蒸水3.5μL、10×Buffer1μL、10U/μL的內切酶0.5μL混勻后離心，37℃培養箱放置2-4h。
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