[發(fā)明專利]一種西那普肽的多肽合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410332391.7
• 申請(qǐng)日: 2014-07-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104098656A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉湘艷;王文琪;崔頎;周逸明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海蘇豪逸明制藥有限公司;周逸明;崔頎
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海欣創(chuàng)專利商標(biāo)事務(wù)所 31217
• 代理人: 包宇霆

1.一種西那普肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步驟：以2-氯-三苯基氯樹(shù)脂起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH進(jìn)行縮合反應(yīng)，獲得保護(hù)二十一肽樹(shù)脂，其間依次脫去Fmoc-保護(hù)基團(tuán)，同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)；切肽，獲得西那普肽粗品；純化后制得西那普肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照固相合成的方法，獲得保護(hù)二十一肽樹(shù)脂，包括如下步驟：

一、制備Fmoc-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）取2-氯-三苯基氯樹(shù)脂用DMF浸泡，使樹(shù)脂充分溶脹，加DIPEA，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH，反應(yīng)，再加甲醇，反應(yīng)；

2）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

二、制備Fmoc-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

三、制備Fmoc-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

四、制備Fmoc-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

五、制備Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

六、制備Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

七、制備Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

八、制備Fmoc-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

九、制備Fmoc-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌三次，抽干；

十、制備Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(tBu)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十一、制備Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十二、制備Fmoc-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十三、制備Fmoc-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys?(Boc)?-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十四、制備Fmoc-Leu-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu?-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十五、制備Fmoc-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-?Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十六、制備Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-?Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十七、制備Fmoc-Lue-Lys(Boc)Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu?-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十八、制備Fmoc-Lue-Lue-Lys(Boc)Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)?-Leu?-Leu-Leu-?Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

十九、制備Fmoc-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-?Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-?Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

二十、制備Fmoc-Lue-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-?Leu-Lys(Boc)-Leu?-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，分別用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Leu-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，加入反應(yīng)容器，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

二十一、制備Fmoc-Lys(Boc)-Lue-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-?Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-樹(shù)脂

1）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

2）取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HATU、HOAt，用接肽試劑溶解，反應(yīng)；

3）抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

4）加脫帽試劑，反應(yīng)，抽干，用DMF、甲醇和DMF洗滌，抽干；

所述接肽試劑為：DIPEA∶DMF=1∶10，體積比；?

所述脫帽試劑為：PIP∶DMF=24.5∶75.5，體積比；?

所述接肽反應(yīng)溫度為：0-5℃；接肽時(shí)間為：55分鐘；?

所述脫帽反應(yīng)溫度為：21-23℃；脫帽時(shí)間18分鐘。