[發(fā)明專利]一種高靈敏度測試游離生物素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410331877.9
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號(hào): CN104330288A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡國華;嚴(yán)婷
• 申請（專利權(quán)）人: 普研（上海）標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N21/31
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 肖愛華

1.一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：利用植物乳桿菌對(duì)游離生物素的特異性和靈敏性，通過游離生物素的濃度與菌體的生長量和生長速度成正比的關(guān)系，根據(jù)吸光值與工作曲線進(jìn)行比較，即可算出試樣中待測物的濃度；

其中，所述吸光值為采用酶標(biāo)儀測量培養(yǎng)后的液體獲得的吸光度。

2.如權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述植物乳桿菌為ATCC8014。

3.如權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于，具體分析步驟如下所示：

步驟一、接種菌懸液的制備；

步驟二、樣品的處理；

步驟三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作；

步驟四、待測液的制作；

步驟五、滅菌；

步驟六、接種；

步驟七、培養(yǎng)；

步驟八、分析測試。

4.如權(quán)利要求3所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述步驟八中包括如下測試程序:步驟七中所述的培養(yǎng)步驟為將試管放入培養(yǎng)箱內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)19h～20h。

5.如權(quán)利要求3所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述步驟八中包括如下測試程序:

(1)、對(duì)每支試管進(jìn)行視覺檢查，接種空白試管S1內(nèi)培養(yǎng)液應(yīng)是澄清的，若出現(xiàn)渾濁，則結(jié)果無效；

(2)、以接種空白孔S1做對(duì)照，測定最高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線試管的吸光度，兩小時(shí)后重新測定，兩次結(jié)果透光率差值若小于2％，則取出全部檢驗(yàn)管測其吸光度A；

(3)、以接種空白試管S2為空白，調(diào)節(jié)吸光度為0，一次讀出其他每支試管的吸光度A，樣品空白的吸光度A一并讀出；

(4)、充分混合每一支試管后，立即將培養(yǎng)液移入96孔板中，每孔200uL,每個(gè)試管讀數(shù)前搖勻樣液，于660nm波長下讀吸光值；

(5)、對(duì)每個(gè)編號(hào)的待測液孔，用每個(gè)孔的吸光度值計(jì)算每毫升該編號(hào)待測液生物素的含量，并計(jì)算該編號(hào)待測液的生物素含量平均值。

6.如權(quán)利要求5所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：每支試管測得的該濃度不得超過該平均值的±15％，超過者要舍去，如果符合該要求的孔少于所有編號(hào)待測液總孔數(shù)的2/3，需要重新檢驗(yàn)；如果符合該要求的孔數(shù)大于等于原來孔數(shù)的2/3，重新計(jì)算每一編號(hào)的有效試樣孔中每毫升測定液生物素含量的平均值，以此平均值計(jì)算全部編號(hào)試樣孔的總平均值，用于計(jì)算試樣中的生物素含量。

7.如權(quán)利要求5所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：用漩渦混合器充分混合每一支試管。

8.如權(quán)利要求7所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：充分混合后還可加入一滴消泡劑。

9.如權(quán)利要求1-8任一所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：用于測定嬰幼兒食品和乳品中的游離生物素。