[發(fā)明專利]一種高靈敏度測試游離生物素的方法無效
【權(quán)利要求書】：
1.一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：利用植物乳桿菌對游離生物素的特異性和靈敏性，通過游離生物素的濃度與菌體的生長量和生長速度成正比的關(guān)系，根據(jù)吸光值與工作曲線進(jìn)行比較，即可算出試樣中待測物的濃度；
其中，所述吸光值為采用酶標(biāo)儀測量培養(yǎng)后的液體獲得的吸光度。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述植物乳桿菌為ATCC8014。
3.如權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于，具體分析步驟如下所示：
步驟一、接種菌懸液的制備；
步驟二、樣品的處理；
步驟三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作；
步驟四、待測液的制作；
步驟五、滅菌；
步驟六、接種；
步驟七、培養(yǎng)；
步驟八、分析測試。
4.如權(quán)利要求3所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述步驟八中包括如下測試程序:步驟七中所述的培養(yǎng)步驟為將試管放入培養(yǎng)箱內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)19h～20h。
5.如權(quán)利要求3所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：所述步驟八中包括如下測試程序:
(1)、對每支試管進(jìn)行視覺檢查，接種空白試管S1內(nèi)培養(yǎng)液應(yīng)是澄清的，若出現(xiàn)渾濁，則結(jié)果無效；
(2)、以接種空白孔S1做對照，測定最高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線試管的吸光度，兩小時后重新測定，兩次結(jié)果透光率差值若小于2％，則取出全部檢驗管測其吸光度A；
(3)、以接種空白試管S2為空白，調(diào)節(jié)吸光度為0，一次讀出其他每支試管的吸光度A，樣品空白的吸光度A一并讀出；
(4)、充分混合每一支試管后，立即將培養(yǎng)液移入96孔板中，每孔200uL,每個試管讀數(shù)前搖勻樣液，于660nm波長下讀吸光值；
(5)、對每個編號的待測液孔，用每個孔的吸光度值計算每毫升該編號待測液生物素的含量，并計算該編號待測液的生物素含量平均值。
6.如權(quán)利要求5所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：每支試管測得的該濃度不得超過該平均值的±15％，超過者要舍去，如果符合該要求的孔少于所有編號待測液總孔數(shù)的2/3，需要重新檢驗；如果符合該要求的孔數(shù)大于等于原來孔數(shù)的2/3，重新計算每一編號的有效試樣孔中每毫升測定液生物素含量的平均值，以此平均值計算全部編號試樣孔的總平均值，用于計算試樣中的生物素含量。
7.如權(quán)利要求5所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：用漩渦混合器充分混合每一支試管。
8.如權(quán)利要求7所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：充分混合后還可加入一滴消泡劑。
9.如權(quán)利要求1-8任一所述的一種高靈敏度測試游離生物素的方法，其特征在于：用于測定嬰幼兒食品和乳品中的游離生物素。
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