[發明專利]重組ULP1激酶的編碼序列、編碼蛋白、含有該編碼序列的質粒、及重組ULP1激酶的制備方法

無效

• 申請號: 201410331141.1
• 申請日: 2014-07-11
• 公開（公告）號: CN104099354A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 孟爾;張東裔;吳慧;鮑邵衡;李文穎;吳磊;朱凌云;柳瓏;王干
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍國防科學技術大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/70;C12N9/12;C12R1/19
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

1.一種重組ULP1激酶的編碼序列，其特征在于，所述編碼序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種質粒，其特征在于，所述質粒含有SEQ?ID?NO.1所示的編碼序列。

3.如權利要求2所述的質粒，其特征在于，所述質粒為pCD-ULP1，其全序列如SEQ?ID?NO.2所示。

4.一種權利要求1所示序列的編碼蛋白，其特征在于，所述蛋白序列如SEQ?ID?NO.3所示。

5.一種重組ULP1激酶的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)將SEQ?ID?NO.1所示的序列通過酶切方式接入表達載體pCold-II，得到質粒pCD-ULP1；(2)將質粒pCD-ULP1轉入大腸桿菌，37℃倒置培養過夜；

(3)挑取單菌落至505培養基，于37℃條件下進行種子培養7—9h；

(4)將種子培養基接入5052培養基，接種量為0.08—1.2％，于16—37℃誘導培養16—72h后離心收集菌體；

(5)將收集的菌體超聲破碎后過鎳柱純化：首先過PBS平衡鎳柱，然后用咪唑洗脫重組的ULP1激酶，再將洗脫出的重組ULP1激酶脫鹽并收集保存。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述離心條件是4℃、5000rpm、離心30min。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)是將收集的菌體用PBS懸浮，然后將懸浮的菌體在功率30％、開5s停12s條件下超聲破碎30min，再將破碎后的菌體于4℃、15000rpm條件下離心30min后過鎳柱純化。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述咪唑洗脫是用50mM咪唑和200mM咪唑各洗脫一次后再用400mM咪唑洗脫；然后將洗脫液加入超濾管中，于4℃、5000rpm條件下離心30min進行脫鹽。