[發明專利]一種用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法

有效

• 申請號: 201410330867.3
• 申請日: 2014-07-11
• 公開（公告）號: CN104089934A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 李立東;王曉瑜;朱茜;唐馥
• 申請（專利權）人: 北京科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C23C18/44
• 代理公司: 北京市廣友專利事務所有限責任公司 11237
• 代理人: 張仲波

1.一種用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將固體基片浸于雙氧水和濃硫酸體積比為2:5-1:2的混合溶液中，保持0.5-1小時取出后，沖洗干燥待用；

(2)將步驟(1)干燥后的固體基片浸入1-2mg/mL帶正電的陽離子聚電解質溶液保持15-30分鐘后取出并沖洗干燥；再將其浸入的1-2mg/mL帶負電的海藻酸鈉溶液保持15-30分鐘后取出沖洗干燥；重復以上過程制備自組裝多層膜；

(3)將步驟(2)制備的自組裝多層膜浸入預先配制的質量百分比為0.5-2％的銀氨溶液中，升溫至60-80℃溫度范圍內，保溫并攪拌0.5-1小時，制得納米銀薄膜；

(4)將步驟(3)制備的納米銀薄膜浸入1-2mg/mL的帶正電的殼聚糖溶液保持15-30分鐘，取出沖洗干燥；再將其浸入1-2mg/mL的帶負電的聚丙烯酸溶液保持15-30分鐘取出并沖洗干燥；重復以上過程得到殼聚糖/聚丙烯酰胺/殼聚糖/聚丙烯酰胺/殼聚糖/聚丙烯酰胺/殼聚糖中間層結構；

(5)將擴增前后的DNA與吖啶類染料分別混合，涂覆于步驟(4)所制備的復合納米銀薄膜表面，保持2-5小時后沖洗干燥；

(6)采用熒光光譜儀測定不同薄膜上吖啶類染料的熒光強度，熒光強度高的為擴增后的DNA,熒光強度低的為未擴增的DNA。

2.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：固體基底為玻璃片、硅片、石英片中的一種。

3.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：選用的帶正電的陽離子聚電解質為聚丙烯基氯化銨，聚乙烯亞胺，聚乙烯胺，聚二甲基二烯丙基氯化銨，聚乙烯吡啶，殼聚糖中的一種或幾種。

4.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：自組裝多層膜為雙層、三層或三層以上結構。

5.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：將50-100mg殼聚糖加入50ml去離子水中，攪拌并升溫至40-50℃溫度范圍內，隨后加入50-100μL醋酸溶液，攪拌12h后過濾，制得殼聚糖溶液濃度為1-2mg/mL。

6.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：待測DNA為雙鏈結構或單鏈結構。

7.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：選用的吖啶類染料為吖啶黃、吖啶橙及其衍生物中的一種或幾種。

8.根據權利要求1所述的用于DNA熒光檢測的復合納米銀薄膜的制備方法，其特征在于：將擴增前后DNA與吖啶類染料混合溶液總體積為80-150μL。