[發(fā)明專利]牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410326515.0
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104087641A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱宏吉;馬力;王世鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/34;A61P9/12
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 張宏祥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種膠原蛋白多肽及其制備方法，更加具體地說，尤其涉及牦牛皮降血壓多肽及其制備方法。?

背景技術(shù)

膠原蛋白肽通常是由膠原或明膠經(jīng)過蛋白酶等降解處理得到的產(chǎn)物，含有的氨基酸和膠原的基本一致，特別是特征氨基酸羥脯氨酸。現(xiàn)代生物代謝的研究發(fā)現(xiàn)，通過一系列酶消化蛋白，可以形成一些小分子的物質(zhì)，并被人體吸收。體內(nèi)吸收不僅局限于游離氨基酸的形式，而且主要是以2-3個氨基酸組成的小肽形式直接吸收。抗高血壓肽又被稱為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽。ACE抑制多肽是通過競爭性抑制作用，阻礙ACE的催化反應(yīng)，與血管緊張素I相比，ACE抑制肽與ACE的結(jié)合能力更強(qiáng)，而且還不容易釋放，從而阻礙ACE催化水解血管緊張素I成為血管緊張素Ⅱ的生化反應(yīng)過程，發(fā)揮降低血壓的作用。?

自從蛇毒中發(fā)現(xiàn)ACE抑制肽，已經(jīng)有許多研究嘗試合成ACE抑制多肽，如依那普利、阿拉普利和賴諾普利等，這些合成化合物被用來治療人體的高血壓和心力衰竭等疾病。但是合成的ACE抑制化合物一般都會有副作用，如咳嗽、味覺障礙、皮疹和血管神經(jīng)性水腫等。因此，在最近10年，人們都在努力尋找天然來源的ACE抑制劑，盡管很少但是這些抑制劑是沒有副作用的。?

牦牛是青藏高原地區(qū)的重要畜種，擁有頑強(qiáng)的生命力，生長環(huán)境是無污染、綠色純天然的青藏高原。牦牛皮中含有人體必需的各種氨基酸、多種營養(yǎng)元素、二十多種對人體有益的礦物質(zhì)。其化學(xué)成分主要由蛋白質(zhì)、水、無機(jī)鹽、脂類、色素及碳水化合物等組成，其中水分占60％-70％，蛋白質(zhì)含量占到30％-40％，脂類的含量的百分比在2.0％-4.0％之間，無機(jī)鹽含量為0.3％-1.0％，碳水化合物及其他占0.5％-1.5％。從牦牛皮中提取天然的膠原蛋白多肽，可拓寬牦牛皮產(chǎn)品的種類，從而充分利用牦牛皮的營養(yǎng)價值和功用，防止浪費(fèi)，保護(hù)環(huán)境。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，對牦牛皮進(jìn)行膠原蛋白提取，進(jìn)行明膠的提取和復(fù)合酶解，獲得具有降血壓功效的膠原蛋白肽，擴(kuò)展牦牛皮的應(yīng)用前景。?

本發(fā)明的技術(shù)目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：?

本發(fā)明提供一種以牦牛皮為主原料的具有降血壓功效的膠原蛋白多肽的制備方法，依據(jù)上述制備方法制備牦牛皮降血壓膠原蛋白多肽，其工藝步驟包括物理及化學(xué)法對原料的預(yù)處理，明膠的制備，復(fù)合酶解制備ACE抑制膠原多肽，通過利用超濾、離子交換層析、凝膠過濾層析和高效液相色譜等方法進(jìn)行分離純化多肽，濃縮干燥，具體步驟是：?

步驟1，牦牛皮的脫毛，即將牦牛皮置于水中清洗除去表面雜質(zhì)，在剪去折干牦牛皮上的毛后在60～80℃溫水中浸泡牦牛皮4～48h，機(jī)械徹底脫毛，清水沖洗，清除毛屑，將皮剪切成0.5×0.5cm的小塊，得到脫毛的牦牛皮，置于-18～-20℃冷凍保存；?

步驟2，牦牛皮的脫脂，即將步驟1脫毛的牦牛皮置于5wt％～20wt％正丁醇的水溶液中(即在溶液中，正丁醇的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5—20％)，在溶液溫度為0～10℃下連續(xù)攪拌4～48h，得到脫脂的牦牛皮，所述步驟1脫毛的牦牛皮與正丁醇的水溶液的質(zhì)量比為1：(5～20)；?

步驟3，牦牛皮的除雜蛋白，即將步驟2脫脂的牦牛皮置于堿液中，在0～10℃下連續(xù)攪拌5～48h，得到除雜蛋白的牦牛皮，其中所述堿液為0.01～0.2M的氫氧化鈉水溶液或者氫氧化鉀水溶液，所述步驟2脫脂的牦牛皮與堿液的質(zhì)量比為1：(15～40)；?

步驟4，牦牛皮的脫酸，即將步驟3除雜蛋白的牦牛皮置于酸液中，在室溫20—25℃攪拌浸泡2～15h，再反復(fù)水洗牦牛皮至pH值達(dá)到5～7，得到脫酸牦牛皮，其中所述酸液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01％～2％的鹽酸水溶液或者硫酸水溶液，所述步驟3除雜蛋白的牦牛皮與酸液的質(zhì)量比為1：(5～15)；?

步驟5，對脫酸牦牛皮進(jìn)行抽提，即將步驟4脫酸的牦牛皮置于70～90℃的熱水中攪拌抽提，所述步驟4脫酸的牦牛皮與熱水的質(zhì)量比為1：(5～15)，在攪拌抽提過程中每隔30～120min進(jìn)行過濾并更換熱水繼續(xù)進(jìn)行攪拌抽提，直至牦牛皮全部溶解，每次過濾得到的濾液匯總成為水抽提產(chǎn)物；?

步驟6，將水抽提產(chǎn)物制備明膠粉末，即將步驟5得到的水抽提產(chǎn)物(即牦牛皮全部溶解后得到的全部膠液)在4000～10000g離心力下離心2～20min，收集上清液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮后干燥得到明膠粉末，2～4℃儲存?zhèn)溆茫?