[發明專利]重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5?His、抗該蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201410325521.4
• 申請日: 2014-07-09
• 公開（公告）號: CN104031152B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 師東方;韓林林;包軍;董秀梅;朱妍;張萍;劉文鑫
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/18;C12N15/62;C12N15/63;C12N15/66;C12N1/21;C12N5/20;G01N33/577;A61K39/395;A61P31/04;C12R1/19;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

1.重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5-His，其特征在于，所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。

2.編碼權利要求1所述的重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5-His的核苷酸序列，優選的，所述的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

3.一種含有如權利要求2所述核苷酸序列的重組表達載體。

4.如權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，通過以下方法構建得到：

(1)基因的設計：

參照耐熱腸毒素STp成熟肽基因序列，進行大腸桿菌密碼子優化后，設計并合成如下兩段核苷酸序列：estp-linker以及estp-his；

其中，estp-linker的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，estp-his的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

(2)estp基因的串聯：

通過同尾酶構建estp-linker-estp-linker-estp-linker-estp-linker-estp-his基因片段，命名為基因片段estp5-his；

(3)表達載體的構建：

將構建的串聯基因estp5-his插入pGEX-6P-1載體中，構建得到重組表達載體。

5.如權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，所述基因片段estp5-his的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

6.一種含有權利要求3-5任一項所述的重組表達載體的宿主細胞，優選的，所述的宿主細胞為大腸桿菌BL21PlySs。

7.權利要求1所述的重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5-His在制備抗耐熱腸毒素STp特異性抗體中的應用。

8.一種分泌抗權利要求1所述的重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5-His的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于所述雜交瘤細胞株命名為C3，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為CGMCC?No.9245。

9.一種抗權利要求1所述的重組豬/牛源大腸桿菌耐熱腸毒素融合蛋白STp5-His的單克隆抗體，其特征在于所述的單克隆抗體是由保藏號為CGMCC?No.9245的雜交瘤細胞分泌產生的。

10.權利要求9所述的單克隆抗體在制備檢測耐熱腸毒素STp試劑中的應用以及在制備由耐熱腸毒素STp引起的疾病治療藥物中的應用。