[發明專利]穩定表達人MATE1轉運體的細胞模型的構建及應用

無效

• 申請號: 201410325014.0
• 申請日: 2014-07-09
• 公開（公告）號: CN104212834A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 雷紅梅;孫思源;李麗萍;涂美娟;王凱;白夢如;周慧;曾蘇;蔣惠娣
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬生物技術領域，涉及穩定表達人multidrug?and?toxin?excretion?protein?1(hMATE1)轉運體的馬丁達比狗腎上皮(Madin-Daby?canine?kidney?cells,MDCK)細胞模型的構建，共轉染人有機陽離子轉運體1(human?organic?cation?transporter?1，hOCT1)和hMATE1的MDCK細胞模型的構建，共轉染人有機陽離子轉運體2(human?organic?cation?transporter?2，hOCT2)和hMATE1的MDCK細胞模型的構建以及三種細胞模型的應用。?

技術背景

隨著對藥物代謝研究的深入，由藥物轉運體介導的零相代謝和三相代謝在藥物體內處置中的作用越來越受到關注。目前已發現solute?carrier(SLC)超家族和ATP-binding?carrier(ABC)超家族的多種轉運體，如有機陽離子轉運體(organic?cation?transporters,OCTs)、有機陰離子轉運多肽(organic?anion?transporting?polypeptides,OATPs)、有機陰離子轉運體(organic?anion?transporters,OATs)、MATEs、P-糖蛋白(p-glycoprotein，P-gp)及乳腺癌耐藥蛋白(breast?cancer?resistance?protein,BCRP)等在藥物的體內處置過程中發揮著重要作用。其中MATEs家族的重要成員hMATE1由人SLC47A1(NM_018242.2)基因編碼，主要分布在肝臟肝血竇側肝細胞的膽毛細管一側和腎小管上皮細胞刷狀緣側，可將多種代謝物和外源性物質外排至膽汁和尿液中[Atsushi?Y.,Ken-ichi?I.Importance?of?the?multidrug?and?toxin?extrusion?MATE/SLC47A?family?to?pharmacokinetics,pharmacodynamics/toxicodynamics?and?pharmacogenomics.British?Jounal?of?Pharmacology.2011；164:1817-1825.]。hMATE1的底物范圍非常廣泛，涵蓋生理條件下呈陽離子的化合物、兩性化合物及陰離子化合物，外源性藥物毒物及內源性代謝物。hMATE1的底物包括MPP⁺(1-methyl-4-phenylpyridinium)、TEA⁺(tetraethylammonium)、二甲雙胍、西咪替丁、4’6-二脒基-2-苯基吲哚(4’6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)、阿昔洛韋、普魯卡因胺、奧沙利鉑、非索非那定、百草枯、肌酐及兩性化合物頭孢氨芐，其底物譜與hOCT1、hOCT2的底物譜有很大的重疊性。由于hOCT1主要分布在人肝臟肝血竇一側的肝細胞的基底側膜上，hOCT2分布在人近端腎小管上皮細胞的基底側膜上，并且已有研究通過免疫熒光法證明hOCT2和hMATE1共同存在于同一腎小管上皮細胞中[Hideyuki?M.,Ken-ichi?I.Precise?comparison?of?protein?localization?among?OCT,OAT?and?MATE?in?human?kidney.Journal?of?pharmaceutical?sciences.2013；102:3302-3308.]，且分別位于細胞的基底側膜和刷狀緣側膜上，可見hOCTs和hMATE1在某些藥物的處置中發揮共同作用。目前，藥物在轉運體層面的相互作用已被認為是引起代謝性藥物相互作用的重要原因之一，在藥物研發階段有必要考察與轉運體的關系。而常用的許多人源細胞系，低表達或不表達轉運體；原代細胞來源困難，且原代細胞上轉運體的表達量?也會隨體外培養時間的延長而減少。因此構建穩定表達人源性轉運體的細胞模型是體外研究藥物與轉運體相互作用的重要工具。?

發明內容