[發明專利]整合素阻斷劑多肽及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201410324306.2
• 申請日: 2014-07-08
• 公開（公告）號: CN104059132A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 康夢實;張力君
• 申請（專利權）人: 南京安吉生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K7/06;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04;A61P19/02;A61P9/10;A61P27/02;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 蔣海軍

技術領域

本發明涉及生物技術藥物領域，具體涉及整合素阻斷劑多肽及其制備方法和制備治療用于關節炎的預防和治療、腫瘤治療、眼科疾病治藥物中的應用。

背景技術

關節炎、細菌引起的炎癥、腫瘤、眼科疾病(如AMD)均被稱為血管相關性疾病。類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是臨床最常見的炎性關節病和主要致殘因素之一。RA的病理過程中，血管新生是一種標志性的組織學改變，新生血管形成伴隨滑膜增生和炎細胞浸潤，是RA中血管翳形成及關節破壞的基礎。原來應該沒有血管存在的關節軟骨因某種異常變化，而形成新的血管，使得軟骨受到侵蝕，造成關節變形或疼痛。新生血管引起類風濕關節炎患者滑膜組織發生異常變化，正常人的關節滑膜內層僅1-2層細胞組成，而RA患者的滑膜內層通常有4-10層細胞(有時甚至超過20層)。這些細胞不僅在數量上異常增多，而且在功能上處于異常活躍的狀態，它們可以分泌大量的細胞因子、信號分子和蛋白酶，加速關節破壞的進程。另外，RA滑膜中還有大量炎性細胞的浸潤，如T細胞、B細胞和單核細胞。

此外，腫瘤、眼病、炎癥都是與血管相關的疾病。腫瘤的生長和轉移依賴新生血管；眼科疾病如年齡相關性黃斑變性(AMD)主要表現是脈絡膜新生血管的生成；炎癥與血管新生是兩個相互聯系,共同發展的病理過程。

新生血管生成，在正常生理條件下，受到高度調節，在生殖、胚胎發育、組織修復和創傷愈合中是必不可少的過程。血管生成在多種病理條件下也會發生，所述病理條件包括：腫瘤生長和轉移；炎性障礙，例如類風濕性關節炎、銀屑病、骨關節炎、炎性腸病、克隆病、潰瘍性結腸類以及其它炎性障礙。

整合素是一類廣泛分布于細胞表面的受體，能介導細胞與細胞外基質及細胞與細胞之間的相互黏附，它們通過連接胞內細胞骨架蛋白和細胞外基質分子的相互作用參與血管生成。目前至少有8種的整合素(α1β1、α2β1、α3β1、α6β1、α6β4、α5β1、αvβ3、αvβ5)參與血管生成，其中αvβ3發揮著重要作用。αvβ3能識別配體分子中的精-甘-天冬序列(arg-gly-asp，RGD)。αvβ3可以表達于多種細胞類型，并與多細胞活動過程中的多種配體結合參與腫瘤的血管生成、侵襲、轉移、炎癥、傷口愈合和凝血等生理和病理過程。因此，含有RGD序列的多肽具有整合素拮抗劑作用，RGD序列可以作為一種載體，靶向運輸到新生血管內皮，從而對新生血管性疾病達到更高效率的治療。因此，血管抑制多肽通過 抑制血管生成不僅可阻止向滑膜輸送氧氣和營養物質，且直接導致血管退化，從而可能抑制RA滑膜增生。抑制新生血管的形成是治療這類疾病的關鍵，而內皮細胞的增殖和遷移是新生血管形成的關鍵步驟。

WO2013097709A1的專利說明書公開了一種整合素阻斷劑多肽，其氨基酸序列為：X-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Y,X的序列為缺失或含有Arg-Gly-Asp序列的多肽，Y的序列為缺失或含有Arg-Gly-Asp序列的多肽。該整合素阻斷劑多肽具有抑制血管內皮細胞的增殖和遷移及對腫瘤細胞的抑制作用。

HM-3是由是在先公開的的整合素阻斷劑，含有18個氨基酸。經前期研究研究發現HM-3具有顯著的抑制血管生成的作用和抗腫瘤的活性，具有極大的開發成抗腫瘤藥物的潛能。

對于長的氨基酸序列而言，其空間結構復雜，二級結構、三級結構及四級結構難以確定。生產成本高。另外，多肽運用到體內后，其半衰期較短，比如HM-3在大鼠體內的半衰期只有27min，但其體內活性依然存在。這種情況的原因是因為一般蛋白質多肽降解產物任然具有活性，有些多肽是以降解的產物發揮作用。為此本實驗室合成了不同長度的多肽序列，分別分析其抗血管生成及抗炎活性，發現這些多肽存在很好的活性。

發明內容

1、發明要解決的技術問題

針對現有的HM-3半衰期短、容易在體內降解的問題，本發明提供了整合素阻斷劑多肽及其制備方法，少于17個氨基酸的序列構成的整合素阻斷劑多肽，HM-3降解片段仍然具有活性，可以用于制備用于治療和預防關節炎以及和治療、腫瘤治療、眼科疾病治藥物。

2、技術方案

整合素阻斷劑多肽，其結構為下列中的一種：